世联博研（北京）科技有限公司的陈工整理了如下文章。

转染效率实验变得更快、可靠和准确

Inish Analyser分析仪

转染效率

转染效率是细胞基因工程的一个重要指标，可应用于生物制剂（包括疫苗和抗体生产）、CAR T 细胞疗法和其他细胞疗法的开发。研究人员努力追求高转染效率和高活力，但这是一个费力的过程。使用传统技术时，细胞在电穿孔后立即铺板。1-2 天后，对细胞进行染色以确定是否表达感兴趣的受体或抗体。这是一个耗时的过程，如果转染效率较低，效率可能会低。

当前方法的问题

什么是转染？

转染是将遗传物质传递到细胞中的过程。一般来说，有两种主要方法：转染（非病毒）与转导（病毒）。迄今为止，常见的基因编辑方法是使用病毒载体（即使用病毒将DNA传递到细胞内），也称为转导。病毒载体有引起患者严重免疫反应的风险，在过去的几项临床试验中已导致许多死亡。然而，病毒载体也带来了巨大的制造挑战，因为除了细胞作为起始材料外，生产过程还必须考虑高度复杂的病毒载体原材料。许多业内人士现在认识到，从长远来看，

因此，转向非病毒转染方法，特别是电穿孔（向细胞施加电场，增加细胞膜的渗透性，使 DNA 被引入细胞），在制造能力方面正在积聚力量：提高再现性和质量控制。电穿孔近年来变得越来越流行，因为在转染较大的基因编辑时，它比病毒转导更有效，这在使用 CRISPR 技术时也更常见。市场上受欢迎的电穿孔器之一是Lonza 的 Amaxa Nucleofector。然而，电穿孔仍然存在挑战，特别是原代细胞，如 T 细胞、B 细胞或干细胞是出了名的难以转染。

确定转染效率的问题

电穿孔后，通常将细胞接种到 96 孔板中。1-2天后，成功转染的细胞开始表达感兴趣的受体。这些细胞受体用荧光染料/染色剂或磁珠标记，使荧光流式细胞仪能够分析和量化成功转染（即基因工程）的细胞。

Inish转染效率预测 (TEP)

Cellix 的Inish 分析仪通过准确分析开膜细胞的百分比来预测转染后的转染效率。我们称之为转染效率预测 (TEP) 测定。TEP测定在电穿孔后立即运行，使您无需等待受体/抗体表达即可确定转染效率。这可以节省时间并改进工作流程，确保您铺板多数量的转染细胞。

Inish Analyser 分析仪产生的结果

结果以散点图和表格的形式显示。

在散点图上，根据您的结果，多可能有 4 个可见群体：

• “活-膜封闭”细胞群由绿点群表示。虽然这些是活细胞，但它们是不成功转染的细胞，因为膜未能打开以接收载体/DNA。
• “活膜开放”细胞群由蓝点群表示。 这是成功转染的细胞群。由于细胞膜已成功打开，这些细胞可以摄取载体。分析和分选此类细胞的能力是 Cellix 有的！
• 死细胞群由红点表示。
• 碎片数量由散点图左侧沿 Y 轴的点数量表示。

门控群体

“门控”群体意味着选择感兴趣的群体进行分析。对于 TEP 测定，这意味着选择“活膜开放” 细胞群体。

• 顶部绿色水平线：线上方是活细胞群所在的位置，线下方是活膜开放细胞群所在的位置。
• 底部红色水平线：在此线上方是活膜开放细胞群所在的位置，线下方是死细胞群所在的位置。
• 垂直线：该线的左侧是碎片群体所在的位置。

通过将手指放在线上并在散点图上向上/向下或向左/向右滑动，可以移动水平线和垂直线。包含所有结果的附表将相应更新。

想提高您的转染效率吗？我们也是。

所有从事细胞转染方法研究的研究人员，无论是在学术界还是在工业界，都知道优化细胞转染所涉及的痛苦。有时，某些细胞似乎比其他细胞更能抵抗转染，通常出于令人沮丧的模糊原因。转染效率低下是否浪费您的时间？我们可以提供帮助。

伊尼什解决方案：

1. 提高整体转染效率

2. 提高基因转染数据的质量

3. 快速追踪成功的基因转染方法并快速优化实验条件

如果您对 Inish Analyser分析仪有更多疑问或想了解更多信息，请访问我们的网站，与我们联系。

Inish Analyser分析仪优点介绍