Cellix 的 Kima 泵：用于剪切流实验的内皮细胞单层细胞培养介绍

世联博研（北京）科技有限公司的陈工整理了本文章

Cellix 的 Kima 泵

用于剪切流实验的内皮细胞单层细胞培养。

介绍

Kima 泵是一款微流体泵，旨在帮助在各种生物芯片和流动室中进行细胞培养（例如内皮细胞），包括Cellix 的 Vena8 Endothelial+生物芯片，可以在24-48 小时内同时培养 8 个单层细胞。如果需要，细胞培养可以持续长达数周。Kima 泵由iPod touch 上的iKima 应用程序控制Kima泵放置在标准培养箱内，而 iPod Touch 作为其控制器则位于培养箱外。Kima 泵通过完耐高压灭菌的管道轻松连接到 Cellix 的 Vena8 Endothelial+ 生物芯片和其他制造商的流动室，并将新鲜培养基脉冲输送到接种在生物芯片微通道内的细胞。iKima 应用程序可从 Apple 的 iTunes 商店下载。

特点和优点：

流动细胞培养：在流动室中简单培养单层内皮细胞，并在 Cellix 的 Vena8 Endothelial+ 生物芯片中于 24-48 小时内培养 8 个单层细胞。
流速： ~250 - 600 ?L/min。如果使用带有 Vena8 生物芯片系列的 Kima 泵，分流器将导致生物芯片 8 个通道中每个通道的流速约为 30 - 75 ?L/min。
再循环培养基：节省试剂且无需额外的流体阀。
培养箱安：无需额外的温度或湿度控制。
脉冲：对培养的细胞单层施加连续或周期性的新鲜培养基脉冲。
可编程：使用 iPod Touch。
易于使用：使用同一控制器和 iPod Touch 控制多 4 个泵。

应用：

用于剪切流实验的内皮细胞单层细胞培养。
使用 Cellix 的 Mirus Evo 或 ExiGo 泵对单层内皮细胞进行细胞间粘附剪切流测定，用于以下研究：

1 心血管/动脉粥样硬化：原代单核细胞粘附于冠状动脉内皮细胞。
2 炎症： THP-1 单核细胞在流动下粘附到 HUVEC。
3 哮喘/慢性阻塞性肺病：嗜酸性粒细胞对人肺微血管内皮细胞 (HMVEC-L) 的粘附研究。
4 肿瘤学 - 乳腺癌： MDA 细胞粘附在 TNF-α 上，在剪切流下刺激 HUVEC。

Kima 泵灌注方案：在 Vena8 Endothelial+ 生物芯片中进行涂层和细胞接种，并使用 Kima 泵进行灌注

注：Kima 泵仅用于交换培养基以供给细胞（即液体脉冲/脉动流），而不是连续流。

步骤1：

Cellix 的 Vena8 Endothelial+生物芯片使用标准移液器吸头进行涂层。将约 12 μL 蛋白质（例如纤连蛋白）分配到每个微通道中。注意入口和出口处的过量液体。

2步：

然后将Vena8 Endothelial+生物芯片放入加湿的无菌培养皿中，并置于 4°C 下过夜包被。

步骤3：

(a)孵育期结束后，添加 5 μL 1.5 x 106 /100 μL (? 15 x 106/mL)

内皮细胞轻轻地进入每个通道。*注：指定浓度适用于原代 HUVEC。

(b)将生物芯片保存在无菌培养皿和 CO2 培养箱中 15-20 分钟。在显微镜下观察生物芯片，并用 50 μL 介质填充所有储液器。将生物芯片在 CO2 培养箱中放置 1.5-2 小时。

步骤4：

用 70% 乙醇清洗Kima泵，然后在生物安罩中使用 5 mL 无菌注射器用无菌介质清洗。

5步：

将管道从介质瓶连接到泵的入口端口。将泵的出口端口（带销钉的 8 路电缆）连接到无菌培养皿。使用 iKima 应用程序和介质清洗泵 3 分钟。

6步：

(a)从培养箱中取出生物芯片并放入生物安罩中。在连接到生物芯片之前，使用 iKima 应用程序开始灌注 - 通常灌注 2 分钟，然后暂停 15-20 分钟。当引脚处形成介质液滴时，轻轻地将 8 路电缆连接到生物芯片，以避免气泡。

(b)将出口引脚连接到生物芯片，该生物芯片连接到废弃瓶或相同的介质瓶，以实现相同介质的再循环。这是在生物安罩中完成的。连接后，将 Kima 平台转移到 CO2 培养箱。

注意：所有管道和瓶子必须在实验前进行高压灭菌。