甲型乙型流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR)
英文名称: 甲乙型流感病毒RNA检测试剂盒
型号:null    产品货号: 甲乙型流感病毒RNA检测试剂盒
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: 中国
试剂级别: 试剂级

甲、乙型流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)
Diagnostic Kit for influenza A、influenza B virus RNA (Fluorescence PCR)

产品特点:

针对:甲型流感病毒M基因
乙型流感病毒NP基因
设计特异性引物和Taqman探针,通过荧光PCR检测仪进行检测。

1. 灵敏度—高于常规细胞培养及血凝试验的25~26倍以上;最低检测下限:5 copies/μl;
2. 敏感度—对甲、乙型流感病毒不同毒株均能检出;
2. 特异性—对非甲、乙型流感病毒的其他流感病毒以及呼吸道病原体均不能检出。

根据荧光PCR技术原理,分别针对甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因设计特异性引物和Taqman探针,通过荧光PCR检测仪进行检测,从而实现对甲、乙型流感病毒RNA的定性检测。

 

试验方法:

1. 核酸分离:
取200μl咽拭子样本进行核酸提取。采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 (硅胶膜吸附法),该试剂盒可用于对呼吸道悬浮液样本中的病毒RNA提取,并按试剂盒说明书要求操作。
本品中的阴性对照参与核酸提取;阳性对照不参与核酸提取。
2. PCR扩增:
2.1 实验设计:
2.1.1待检样本检测:每份样本分别使用2种反应液(FluA和FluB反应液)进行检测,根据2种反应液的检测结果对样本进行判定。
2.1.2对照品检测:每次试验都应设置阴性对照和阳性对照。
2.2反应体系的配制:
2.2.1准备工作:将2种反应液(FluA和FluB反应液)融化后振荡混匀,离心6000rpm 10秒。
2.2.2 两种反应体系(FluA和FluB)配制:取2个1.5ml 无核酸酶离心管,计算待测样本数量(n),分别取20μl×(n+2)反应液(FluA和FluB反应液)、1μl×(n+2)DNA聚合酶和0.35μl×(n+2)逆转录酶充分混匀,离心6000rpm 10秒。
n+2=n份样本+1份阳性对照+1份阴性对照;
2.3反应体系分管:
每份待测样本设置2个PCR扩增管(分别为FluA和FluB),分别将每种反应体系按20μl/管分装至对应的PCR扩增管中。
2.4加样:
取5μl(待测样本RNA、阴性对照、阳性对照)分别加入2个PCR扩增管(FluA和FluB)。
2.5扩增检测:
将加样后的PCR扩增管分别转移到全自动荧光定量PCR检测仪上进行扩增检测,不同仪器的设置如下:
2.5.1全自动荧光定量PCR检测仪(RG3000、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型)扩增程序等详见说明书

结果的解释、产品性能指标:

3.1本品荧光探针的报告荧光为FAM,应选择F1(Fam)通道分析试验结果。
3.2 基线(Baseline)范围根据仪器要求设定,目的为校正背景荧光干扰,终止循环(END)一般设置为最强样本出现扩增信号的前3-4个循环。
3.3 阈值线用于判断样本是否扩增,应调整使阈值线高于荧光背景和阴性对照的荧光信号,或点击分析(Analysis)自动获得。
1. 各种判读模式如下:
反应液 模式1 模式2 模式3 模式4
FluA - + + -
FluB - - + +
结果判断 甲、乙型流感病毒RNA阴性 甲型流感病毒RNA阳性、乙型流感病毒RNA阴性 甲、乙型流感病毒RNA阳性 甲型流感病毒RNA阴性、乙型流感病毒RNA阳性
2. 结果在灰区的样本需重复试验:取400μl样本重新提取RNA(核酸分离试剂盒中裂解液、助沉剂、无水乙醇的用量加倍,其他组分的用量不变)并检测。复检结果Ct<40.0的样本为阳性,否则为阴性。
 

规格、有效期:

【包装规格】48人份/盒。
【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存,有效期暂定6个月,阳性对照反复冻融次数不得超过5次。
【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光PCR检测仪。