甲型乙型流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR) 英文名称: 甲乙型流感病毒RNA检测试剂盒 |
型号:null 产品货号: 甲乙型流感病毒RNA检测试剂盒 |
价格:请致电:010-57128832,18610462672 |
品牌: 中国 试剂级别: 试剂级 |
甲、乙型流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法) Diagnostic Kit for influenza A、influenza B virus RNA (Fluorescence PCR) 产品特点:针对:甲型流感病毒M基因 1. 灵敏度—高于常规细胞培养及血凝试验的25~26倍以上;最低检测下限:5 copies/μl;
试验方法:1. 核酸分离: 取200μl咽拭子样本进行核酸提取。采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 (硅胶膜吸附法),该试剂盒可用于对呼吸道悬浮液样本中的病毒RNA提取,并按试剂盒说明书要求操作。 本品中的阴性对照参与核酸提取;阳性对照不参与核酸提取。 2. PCR扩增: 2.1 实验设计: 2.1.1待检样本检测:每份样本分别使用2种反应液(FluA和FluB反应液)进行检测,根据2种反应液的检测结果对样本进行判定。 2.1.2对照品检测:每次试验都应设置阴性对照和阳性对照。 2.2反应体系的配制: 2.2.1准备工作:将2种反应液(FluA和FluB反应液)融化后振荡混匀,离心6000rpm 10秒。 2.2.2 两种反应体系(FluA和FluB)配制:取2个1.5ml 无核酸酶离心管,计算待测样本数量(n),分别取20μl×(n+2)反应液(FluA和FluB反应液)、1μl×(n+2)DNA聚合酶和0.35μl×(n+2)逆转录酶充分混匀,离心6000rpm 10秒。 n+2=n份样本+1份阳性对照+1份阴性对照; 2.3反应体系分管: 每份待测样本设置2个PCR扩增管(分别为FluA和FluB),分别将每种反应体系按20μl/管分装至对应的PCR扩增管中。 2.4加样: 取5μl(待测样本RNA、阴性对照、阳性对照)分别加入2个PCR扩增管(FluA和FluB)。 2.5扩增检测: 将加样后的PCR扩增管分别转移到全自动荧光定量PCR检测仪上进行扩增检测,不同仪器的设置如下: 2.5.1全自动荧光定量PCR检测仪(RG3000、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型)扩增程序等详见说明书 结果的解释、产品性能指标:3.1本品荧光探针的报告荧光为FAM,应选择F1(Fam)通道分析试验结果。 3.2 基线(Baseline)范围根据仪器要求设定,目的为校正背景荧光干扰,终止循环(END)一般设置为最强样本出现扩增信号的前3-4个循环。 3.3 阈值线用于判断样本是否扩增,应调整使阈值线高于荧光背景和阴性对照的荧光信号,或点击分析(Analysis)自动获得。 1. 各种判读模式如下: 反应液 模式1 模式2 模式3 模式4 FluA - + + - FluB - - + + 结果判断 甲、乙型流感病毒RNA阴性 甲型流感病毒RNA阳性、乙型流感病毒RNA阴性 甲、乙型流感病毒RNA阳性 甲型流感病毒RNA阴性、乙型流感病毒RNA阳性 2. 结果在灰区的样本需重复试验:取400μl样本重新提取RNA(核酸分离试剂盒中裂解液、助沉剂、无水乙醇的用量加倍,其他组分的用量不变)并检测。复检结果Ct<40.0的样本为阳性,否则为阴性。 规格、有效期:【包装规格】48人份/盒。 【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存,有效期暂定6个月,阳性对照反复冻融次数不得超过5次。 【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光PCR检测仪。 |