禽流感病毒核酸试剂盒荧光PCR 英文名称: Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
型号:null 产品货号: H7N9 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
价格:请致电:010-57128832,18610462672 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
品牌: 中国 试剂级别: 试剂级 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
禽流感病毒H7N9(2013)核酸测定试剂盒(荧光PCR法) Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit 【产品名称】 通用名称:禽流感病毒H7N9(2013)核酸测定试剂盒(荧光PCR法) 英文名称:Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit 【包装规格】 25人份/盒 【预期用途】通过对样本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特异性RNA核酸片段分别进行定性检测,可用于临床对可疑感染患者的病原学鉴别诊断。 【检验原理】本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术结合荧光探针技术,对禽流感H7N9特异性核酸片段进行荧光PCR检测。 【试剂盒主要组成成份】
说明:不同批号的组分不可以互换使用。 自备试剂:Trizol;氯仿;75%乙醇;异丙醇或磁珠法RNA提取试剂;本公司可以代为订购或提供销售商联系方式。 【储存条件和有效期】 试剂盒应在-20℃及以下温度避光保存,有效期12个月。采用冰盒行运输;荧光PCR检测混合液反复冻融不宜超过3次。 【适用仪器】 本试剂盒适用于ABI7000,ABI7300,ABI7500,ABI7900,MJ-chromo4,MX3000P,MX3005P,SmartCyclerⅡ,Rotor-Gene6000,Lightcycler R480,iCycleriQ4,iCycleriQ5,Bio-Rad CFX96,SLAN等多色荧光PCR仪及相应软件。 【标本要求】 人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管(含0.4ml灭菌生理盐水),用无菌棉球将试管塞紧后,密闭送检。标本可立即用于检测,也可保存于-20℃待测。【检验方法】 1.标本、对照品的核酸裂解处理 用商品化(取得医疗器械许可证)的RNA提取试剂盒处理标本,具体操作参见该试剂盒说明书。 或用Trizol法提取,方法如下:取100?l样品置于1.5ml 离心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100?l氯仿, 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次; 13000rpm离心15min, 吸取上层液体,加入等体积异丙醇,颠倒混匀室温静置10min, 13000rpm离心10min,轻轻倒去上清;加入700?l 75%乙醇,颠倒洗涤,13000rpm离心5min,轻轻倒去上清,倒置于吸水纸上,弃尽液体或4000rpm离心5sec,将管壁上的残余液体甩到管底部,用微量加样器尽量吸干液体,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。 2.试剂配制 取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶(n为反应管数),振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。 3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中,然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中,盖好管盖,立即进行PCR扩增反应。 4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上,推荐循环参数设置: 45℃×10min; 95℃×15min;循环一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循环45次;单点荧光检测在60℃,反应体系为25?l。 荧光通道检测选择:选用FAM通道。 备注:如使用ABI系列PCR仪,请务必于passive reference 和 quencher处均选择“none”。 5. 阈值设定 阈值设定原则以阈值线刚好超过DEPC-H2O的最高点。 6. 质量控制:试剂盒各对照品须达到以下要求,否则实验视为无效。
7. 试验结果的判断
进行定量检测时,仪器生成标准曲线后,自动显示待检样品定量值。 【参考值范围】阴性(检测对象H7N9为病原微生物,在健康人体中不存在)。 【对检验结果的解释】实验室环境污染,试剂污染,样品交叉污染会出现假阳性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。 【检验方法的局限性】当检测样本中被检核酸浓度含量低于最低检测限5×103copies/ml时可能会发生假阴性的结果。 【产品性能指标】最低检测限:1×103copies/ml; 【注意事项】 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。 1. 整个检测过程应严格分在三区进行:PCR反应体系的配制区;标本处理、加样区;PCR扩增、荧光检测及结果分析区。各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。实验后即请清洁工作台,并进行消毒。 2. 使用不含荧光物质的一次性手套(经常替换) 、一次性专用离心管、自卸式移液器和带滤嘴吸头。 3. 试剂准备和标本处理应使用超净工作台(负压式)或防污染罩,以防止对环境污染。 4. 每次实验应设置阴、阳性对照品。 5. 操作人员应经过专业培训,具有一定经验和操作技能。 6. 操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次**或75%酒精、紫外线灯或臭氧消毒处理。 7. 实验中接触过标准品和对照品的废弃物品(如吸头)、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。 8. 试剂使用前应在常温下充分融化并混匀。 9. PCR反应混合液应避光保存。 10. 反应管中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧。 11. 不同批号的试剂请勿混用,请在有效期内使用试剂盒。 |