禽流感病毒H5N1亚型(AIV-H5N1)核酸扩增检测试剂盒

 

【名称】

中文名：禽流感病毒H5N1亚型(AIV-H5N1)核酸扩增检测试剂盒

英文名：Avian Influenza Virus Type H5N1 (AIV-H5N1) Polymerase Chain Reaction (PCR) Diagnostic Kit

                                                                   

【目的】

本试剂盒适用于检测发病动物肺脏等组织、体液或淋巴结等标本以及细胞培养液中禽流感病毒RNA，适用于禽流感病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

 

【原理】

本试剂盒用一对禽流感病毒H5N1亚型特异性引物，用一步法PCR对禽流感病毒H5N1亚型进行体外扩增，产物经凝胶电泳，溴化乙锭(EB)染色，紫外灯观察，从而达到快速检测之目的。

 

【试剂组成】

名      称	数      量	规      格
RNA提取液A	1   瓶	10ml/瓶
RNA提取液B	1   瓶	10ml/瓶
逆转录酶系	1   管	40μl/管
Taq酶系	1   管	40μl/管
AIV-H5 PCR MIX	1   管	800μl/管
AIV-H5阳性质控品	1   管	100μl/管
阴性质控品	1   管	250μl/管
DEPC水	1   管	2000μl/管

【储存条件】打开包装后RNA提取液A、RNA提取液B  4℃保存；其余-20℃保存，避免反复冻融。自备75%乙醇。

【试剂规格及有效期】40头份/盒，有效期6个月。

 

【标本采集】

1. 适用标本类型：发病动物组织、体液或淋巴结等标本；病毒细胞培养液

2. 标本采集： 

2.1 组织：取发病动物肺、肝、脾、肺、肾、淋巴结及胰腺等组织约1g，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

2.2 体液及培养液体：取上述标本约1ml，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

2.3 咽及泄殖腔等试子：用棉试子取咽或泄殖腔分泌物，将试子放入盛有1.0ml PBS的离心管中，立即送检。

 

 

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。

 

【适用仪器】取得资格认证的定性PCR仪。

 

【使用方法】

1．RNA提取

1.1样品处理

固体组织：取0.5g左右组织用玻璃匀浆器匀浆或剪刀剪碎，加入1.5ml生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5ml的EP管中，10000rpm离心2min。取上清100μl于1.5ml的EP管中，加入200μl RNA提取液A充分震荡，静置3min。

血清或病毒液：取100μl血清加入200μl RNA提取液A充分震荡，静置3min。

阴性质控品：处理：取100μl阴性质控品加入200μl RNA提取液A充分震荡，静置3min。

1.2.加入200μl RNA提取液B，用力震荡15s，4℃ 13,000rpm离心5min。

1.3.弃上清，加入1ml 75%乙醇，充分混匀，13,000rpm离心5min，小心吸去大部分残留液体。

1.4.将提取管敞口在室温空气中干燥10min，使液体挥发干净，用20μl DEPC水溶解沉淀。

AIV-H5阳性质控品：直接取3μl进行PCR扩增。