Calcium Phosphate Cell Transfection Kit

***酸钙法细胞转染试剂

产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit ***酸钙法细胞转染试剂	40803ES70	200T	-20℃	298.00

产品描述

***酸钙法转染DNA是基于形成***酸钙-DNA沉淀的原理：***酸钙可促使细胞膜和DNA的结合，之后通过细胞内吞的作用将外源DNA转入目的细胞。该方法曾被用于多种细胞系的转染。翊圣生物的***酸钙法细胞转染试剂是在传统***酸钙法的基础上经过特别优化，不仅在转染效率有了较大提高，且降低了细胞毒性，特别适合于293或293T细胞的转染，对其他大多数常见细胞如Hela、CHO也具有较好的转染效果，不仅适用于细胞的瞬时转染，且适用于稳转株的筛选。

本品为无菌包装，可直接使用。

产品组分

组分编号	组分名称	40803ES70/规格
40803-A	CaCl2溶液	20ml
40803-B	BBS溶液	20ml

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，确保A260/A280＞1.8，且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。

3）在用***酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的CO₂，CO₂的最佳浓度为3%左右。

4）BBS溶液的pH值直接关系到转染效率，尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的CO₂酸化。

5）转染时由于质粒、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。

 使用说明

1.  对于贴壁细胞（以6孔板为例）

①转染前一天（20-24h），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时密度为70-90%。

②在转染前30-60min，吸去细胞培养液，加入新鲜的完全培养液（不含抗生素）2ml。

【注】：转染时最好使用新鲜配制的培养液；转染用的培养液可以在配制后分装冻存，使用时再解冻。

③取2-6µg待转染的质粒DNA（质粒总体积不宜超过20µl），加入到100µl CaCl₂溶液中，充分混匀。

④把DNA- CaCl₂溶液加入到100µl BBS溶液中，混匀，室温孵育10-20min。此时不会产生可见的沉淀。

【注】：该步骤顺序不能反，需把DNA- CaCl₂溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA- CaCl₂溶液中。

⑤把DNA- CaCl₂-BBS混合物均匀滴加到整个6孔板内。5%CO₂，37℃培养细胞。

⑥根据实验要求和***酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16h后轻轻晃动培养板数次以充分悬浮一些***酸钙沉淀，吸去含***酸钙沉淀的培养液，加入2ml新鲜的完全培养液，继续培养。

⑦通常在转染约24h后就可以检测到转染基因的表达。

2.  对于悬浮细胞（以6孔板为例）

①离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。

②按照上面的步骤③和④制备DNA- CaCl₂-BBS混合物。

③每10⁶个细胞的沉淀，用100µl DNA- CaCl₂-BBS混合物重新悬浮，室温放置20min。

④在一个6孔板孔内加入2ml完全培养液（不含抗生素），然后加入来自上一步的细胞-DNA- CaCl₂-BBS混合物，混匀。

⑤5% CO₂，37℃培养细胞。

⑥根据实验要求和***酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16h后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2ml完全培养液重新悬浮细胞，继续培养。

⑦通常在转染约24小时后就可以检测到转染基因的表达。

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HB170520