碳酸环己胺
型号:null    产品货号： 20190-03-8
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 苏州

中间体

罅砉翰煌嘈徒涸浮�1. 剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入5mlF液及20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内；离心沉淀1500转/分×3 min，再用细胞洗涤液清洗3次，每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片，以200目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml的单细胞悬液备用。2. 匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入70ml组织研磨器内，加入2mlF液及20%胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用5mlF液及20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经200目不锈钢滤网（另购）过滤；离心沉淀800rpm×2min ，再用细胞洗涤液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml的单细胞悬液备用。3. 酶消化法：A．用F液将胶原酶稀释，终浓度为400 U/ml，至于冰浴备用。B．取一适当大小培养皿进行操作：用镊子夹碎动物脾脏，加入稀释后的胶原酶，37℃消化20分钟。C．以100或200目不锈钢滤网（另购）过滤，离心沉淀800prm×2min ，再用细胞洗涤液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×109个/ml的单细胞悬液备用。细胞计数方法:细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。计数与计算过程1）在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。2）用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。3）置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。4）按下式计数细胞悬液的密度： 细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml×稀释倍数公式中乘以104 因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3而 1ml＝1000mm3细胞计数要点：A．进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2 时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。B．要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。C．取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确；D．数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。E． 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。二、脾脏淋巴细胞分离方法1．取1ml脾脏细胞悬液（细胞浓度为2×108-1×109个/ml）小心叠加在C 液之液面上（比例为1：1），20℃±2℃，400g（约1500 转/分），离心20 分钟（半径15cm 水平转子）。2. 此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层;为稀释液层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含细胞洗涤液4-5 毫升的试管中，充分混匀后，以500g（约1800 转/分）离心20 分钟。沉淀经反复洗涤2 次即得所需淋巴细胞。注： 提取率约为80%。分离图例：三、注意事项A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。B． 待分离的骨髓要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果最好，且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。C． 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。D． 最好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。四、产品性能指标pH 7.0-7.5渗透压 280-340mOsmol/kg内毒素 ≤0.5EU/ml无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下，含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下五、贮藏及保存期限18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。注：若保证无微生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。