LSM淋巴细胞分离液

LYMPHOCYTE SEPARATION MEDIUM 

用途：

 用于体外分离外周血淋巴细胞，也可以从其他来源中分离单核细胞，包括脐带血细胞和骨髓细胞。

方法概述：

    早期分离白细胞的方法，会用一种化合物混合血液。此化合物能够聚集红细胞，只轻微影响白细胞。通过离心，红细胞由于密度增加而聚集沉淀，同时从离心管内上层收集白细胞。

Böyum提出了一种更方便快速的分离方法，即以Ficoll^®-甲泛影钠溶液为介质进行离心。稀释的血液在Ficoll-甲泛影钠溶液中分层，之后低速短时离心。红细胞和多形核粒细胞沉降到管底，单个核细胞（淋巴细胞）和血小板可以从两个分层间的分界面处收集。

    许多研究者不断改进了Böyum方法，对于MP生物医学公司生产的LSM，其方法的独特之处在于成功运用泛影酸钠代替了甲泛影钠。

程序原理：

    去纤维蛋白或肝素化人血以1：1的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释，在分离溶液中分层，低速离心30min。离心过程中，由于差速迁移最终形成不同的细胞层。

    聚集在管底的颗粒主要是红细胞和多形核粒细胞，它们通过梯度迁移至管底。由于其密度不同，淋巴细胞和其他单个核细胞（单核细胞和血小板）分布在血浆和LSM两层之间。淋巴细胞可以通过吸取分界层溶液回收，最后进一步清洗去除血小板，LSM和血浆。

试剂：

LSM^® 是一种滤膜过滤除菌的溶液，每100ml包含6.2g聚蔗糖和9.4g泛影酸钠。20℃下密度是1.0770-1.0800g/ml。

使用说明：

    以下的操作步骤是最初由Böyum.设计的程序中众多改良版本的一种。此程序经改良用于去纤维蛋白或抗凝血剂处理过的人体血液；对于其他物种或者其他组织的血液，改变此程序也许是有必要的。

 

1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合

2. 无菌转移3 ml LSM到15 ml离心管中。

3. 混合2 ml去纤维蛋白血液或肝素化血液 和2 ml 生理盐水

4. 仔细的将稀释血液加入含有3 ml LSM（室温）的15ml离心管中，在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中。

5. 室温下400xg离心15-30min，离心可以沉淀红细胞和多形核白细胞，同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞，如上图所示（具体分层情况为血浆层-单个核细胞层-LSM层-RBC颗粒）。

6. 吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。

7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM，并转移到另外一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至离心管内的淋巴细胞层中，室温（18-25°C）离心10分钟，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻，例如160 – 260 xg（清洗去除LSM，并降低血小板的百分比）。

8. 再用平衡盐缓冲液清洗细胞，最后用适当的培养基重悬细胞。

　

订购信息：相当于sigma公司的Histopaque^®-1077产品

 

名称	货号	规格	单价	促销价
淋巴细胞分离液（MPbio公司产品）	0850494X	100ML	660元	260元
	0850494	100ML*5	1549元	1150元
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厂家说明

    MP Biomedicals生物医学公司是位于美国加利福尼亚州的知名生命科学和生物技术厂商。2004年底成功收购Qbiogene、ICN，现在全球有5个大型仓库，能够及时供应各行业需求，亚洲仓库位于新加坡。它致力于生命科学领域的基础研究和探索。目前它提供55000多种产品，是世界上能全面提供生命科学产品和临床诊断产品的几家厂商之一。