Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式为C₂₅H₂₄N₆O·3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。
    Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
    Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
    Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
 

试剂盒组成	规格	保存条件
Hoechst 33258浓缩液（50X）	1ml	-20℃避光
Hoechst 33258稀释液	50ml	2-8℃

此染色液做成浓缩液和稀释液主要是为了使用方便，因为浓缩液才1ml,解冻起来很快，实际也可以一次将浓缩液都加入稀释液中，混匀使用。但如果一次使用量比较少，使用次数比较多，最好是适当分装一下，免得多次冻融。

使用说明：
Hoechst 33258染色液染色液的配制：将Hoechst 33258浓缩液取出解冻，轻轻混匀，短时间离心，根据使用量，按照1ml33258稀释液加入20ul33258浓缩液的比例配制，即成Hoechst 33258染色液。此配好的染色液深度为10ug/ml,如果感觉染色颜色比较深，可适当的稀释（用稀释液）。此配好的染色液未用完可存放于-20℃避光。
1. 对于固定的细胞或组织：

   a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。

 

   b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

 

   c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

 

   d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或组织：

   a. 加入适当量Hoechst 33258染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

 

   b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。