样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。本产品仅供科研使用欢迎来电咨询详细产品说明书。 

　　DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI(橙色荧光)，DiO(绿色荧光)，DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。

　　　　     * Omega滤光器由Omega公司提供(www. omegafilters.com);Chroma滤光器由Chroma公司提供(www. chroma.com)。

　　**DiR的发射波长肉眼不可见，所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器。

　　使用方法

　　1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备

　　(1)配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。

　　注意：未使用的储存液保存在-20 oC，避免反复冻融。

　　(2)工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5 µM的工作液。

　　注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。

　　2. 悬浮细胞染色

　　(1)悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。

　　(2)在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

　　(3)染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。

　　(4)倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。

　　(5)重复(3)，(4)步骤两次以上。

　　3. 粘壁细胞的染色

　　(1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。

　　(2)从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

　　(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

　　(4)在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

　　(5)吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

　　4. 显微镜检测

　　(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

　　(2)多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

　　a) DiI和DiO=Omega XF52，Chroma 51004;

　　b) DiI和DiD=Omega XF92，Chroma 51007;

　　c) DiI，DiO和DiD=Omega XF93，Chroma 61005

　　5. 流式细胞仪的检测

　　DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。

　　储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。 

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