MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 线粒体超氧化物红色荧光探针
英文名称: MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator
型号:null    产品货号: 40778ES50
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: yeasen

 线粒体超氧化物红色荧光探针

产品信息

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价格(元)

MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 线粒体超氧化物红色荧光探针

40778ES50

50 µg

-20

578.00

产品描述

MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator,一种新型线粒体荧光探针,可特异性靶向线粒体,从而选择性检测线粒体内的超氧化物。该探针可透过活细胞膜,并选择性进入线粒体。一旦进入线粒体,该探针即可被超氧化物氧化发出红色荧光。本品可被超氧化物而非其他活性氧类(ROS)和活性氮类(RNS)快速氧化。氧化产物结合核酸后,可产生大量荧光。

本品以粉末形式提供。

产品性质

分子式(Formula

C43H43N3IP

分子量(Molecular Weight

759.71

外观(Appearance

类白色固体

荧光光谱 Fluorescence Spectral

探针本身的Ex/Em= 356/411nm;氧化型MitoSOX探针-核酸的Ex/Em= 510/580nm

溶解性(Solubility

溶于DMSO

纯度(Purity

≥97%

结构式(Structure

运输和保存方法

室温运输。-20避光干燥保存,避免反复冻融,有效期至少6个月。

注意事项

1)本品易被氧化,避免将本品与空气接触。

2)本品属于溴化乙锭(EB)衍生物,具有毒性,请小心操作。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液制备(5mM

本品是以粉末形式提供,使用前需将本品回温至室温。

50µg MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator中加入13µl DMSO,混匀即可配制成5mM的储存液。

2. 操作方法

不同的实验目的使用不同的探针浓度,以下的起始操作条件仅作参考,可根据细胞类型和其他的相关因素进行适当调整。

2.1  5µM工作液的配制

用合适缓冲液(如HBSS,含Ca2+Mg2+1000倍稀释上述MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 5 mM储存液至其终浓度为5µM.

【注】:MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator工作液浓度不能超过5µM,否则会有细胞毒性,如改变线粒体形态,探针对核酸或胞质的选择性等。

2.2 加载细胞:加入1-2ml探针工作液充分覆盖爬片生长的细胞,于37避光孵育10min

2.3 清洗:用预热的合适缓冲液轻洗细胞3次。

2.4 镜检:选择合适的复染液对细胞进行复染,封片后进行观察。

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i-font-family:"Times New Roman"; mso-hansi-font-family:"Times New Roman"">公式一. 利用下面公式计算Cy3标记效率(DOL)及其浓度(mg/ml

Eq.1  Number of Cy3 dye per protein=molarity Cy3 dye / molarity protein

Eq.2  [Molarity of Cy3 dye]=A555555

Eq.3  [Molarity of protein]=A280C280

Eq.4  mg/ml=[A280-(A555×0.08)/(E1%/10)]×dilution factor

【注】上述参数如下:

A555=conjugate absorbance at 555±2nm

ε555=molarextinction coefficient Cys dye =150000M-1cm-1

A280= conjugate absorbance at 280nm

A280C =corrected conjugate absorbance at 280nm= A280-( A555×0.08)

ε280= molarextinction coefficient protein(M-1cm-1)=MWp×E1%/10

应用举例

用高于抗体摩尔浓度20倍的Cy3-NHS标记 0.1 ml山羊IgG(浓度为1mg/ml)。标记后脱盐去除未标记染料,在PBS中测定(1:5稀释)测定其A280A555:

A280=0.2906 

A555=0.9825

另:山羊IgG分子量为150kDa, E1%=13.6 or 204000M-1cm-1

计算DOL如下:

By Equation 2      Molarity of Cy3 dye=0.9825/150000 M-1cm-1=6.55µM

By Equation 3      Molarity of IgG =0.2906-(0.9825×0.08)/204000 M-1cm-1=1.039µM

By Equation 1      number of Cy3 per IgG=6.55µM/1.039µM=6.3

则计算Cy3-IgG protein 浓度为(mg/ml):

By Equation 4     mg/ml=[0.2906-(0.9825×0.08)/1.36]×5=0.78mg/ml