T-2毒素ELISA试剂盒
英文名称: T-2 Toxin ELISA Kit
型号:null    产品货号: ZZKT2-E01
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: 德国
试剂级别: 生化级

T-2毒素ELISA试剂盒 96 Tests

     T-2毒素是由多种真菌,主要是三线镰刀菌产生的单端孢霉烯族化合物(trichothecenesTS)之一。它广泛分布于自然界,是常见的污染田间作物和库存谷物的主要毒素,对人、畜危害较大。T-2毒素主要作用于细胞分裂旺盛的组织器官,如胸腺、骨髓、肝、脾、淋巴结、生殖腺及胃肠粘膜等,抑制这些器官细胞蛋白质和DNA合成。此外,还发现该毒素可引起淋巴细胞中DNA单链的断裂。T-2毒素还可作用于氧化***酸化的多个部位而引起线粒体呼吸抑制。

检测样品:

上海甄准生物提供T-2毒素ELISA试剂盒具有高灵敏度检测系统,特别适合于定量检测谷物、啤酒、牛奶和肉中T-2毒素污染物。

产品特点:

灵敏度:0.9 –11.7 ppb

回收率(加样样品)93-115%

培养时间:20min

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规格

ZZKT2-E01

T-2毒素ELISA试剂盒

T-2 Toxin ELISA Kit

96 Tests

检测原理:

上海甄准生物提供的T-2毒素检测试剂盒是酶联免疫检测方法。抗体结合蛋白包被在微孔板的表面。T-2毒素含有样品或标准品和T-2毒素过氧化物酶共轭物和检测T-2毒素抗体加到微孔板的孔中。共轭物和样品/标准品中T-2毒素竞争抗体位点。同时抗T-2毒素抗体连接到包被的抗体结合蛋白在室温下培养10分钟后,稀溶液洗涤将微孔板除去未结合的物质。加入底物溶液并培养10分钟,直到变蓝色。加入终止液抑制显色反应,颜色变为黄色。在450nm处检测黄色吸光度。T-2毒素的浓度与测试样品的颜色强度直接成比例。

盒子包含试剂:

 试剂盒使用96次。储存在2-8°C

112*8微孔板,包被抗体结合蛋白

2 T-2毒素标准品(0, 0.5, 2.5, 10, 25, 50 ng/mL)6 vials ,每瓶1.0 ml,红色,即用型。

3、抗T-2毒素抗体(rabbit)6ml,红色,即用型。

4Conjugate (T-2 Toxin-Peroxidase):6mL,红色,即用型。

5、底物溶液(TMB)15ml 预染红色 即用型。

6、终止液(0.5 M H2SO4): 15 mL,即用型。

7、样品稀释液(PBS): 2 x 60 mL,即用型。

8、洗涤液(PBS + Tween 20): 60 mL 10x浓缩液。稀释1+9蒸馏水。稀释液保存在4°C,至少可保存1周。如果冷藏结晶过程中沉淀,浓缩物应加热至3715分钟。

9、塑料袋储存未使用微孔板 

10、操作手册。

示例标准值:

下表是示例的典型的标准曲线。计算值是0ng/ml标准品的吸光度。这些值仅是示例。

T-2毒素 (ng/mL

% binding of 0 ng/mL

0

100

0.5

85

2.5

62

10

35

25

20

50

13


性能参数:

1、  灵敏度

检测限(LOD):0.3ng/ml.

定量极限(LOQ):0.5ng/ml.

由于样品基质多样性和空白影响,结果低于LODLOQ,认为阴性的

2、精确度

内部分析精确度  

3-8%

交互分析精确度  

9-11%

3、线性度

稀释样品线性度:86-107%. 


References

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2. Kankkunen P, et al. (2009) – Trichothecene my-cotoxins activate inflammatory response in hu-man macrophages. J Immunol, 182(10):6418-25

3. Yoshizawa T, et al. (2004) – A practical method for measuring Deoxynivalenol, Nivalenol, and T-2 + HT-2 Toxin in foods by an enzyme-linke im-munosorbent assay using monoclonal antibod-ies. Biosc Biot Biochem, 68(10):2076-85

4. Chu F S, et al. (1986) – Improved method for production of antibodies against t-2 toxin and di-acetoxyscirpenol in rabbits. Appl Env Microb, 51(1):132-37

5. Ohtani K, et al. (1988) – Improved preparation of T-2 toxin-protein conjugates. Toxicon, 26(11):1107-11

6. Katja Bernhardine (2008) – Entwicklung und Validierung von Enzymimmuntests zum Nach-weis von T-2 Toxin und HT-2 Toxin sowie Vor-kommen dieser Mykotoxine in Lebensmitteln des deutschen Marktes. Dissertation, Tierärztliche Fakultät München

7. Suproniene S, et al. (2010) – Distribution of trichothecene and zearalenone producing fusa-rium species in grain of different cereal species and cultivars grown under organic farming condi-tions in Lithuania. Ann Agric Environ Med, 17:79-86

8. Barthel J, et al. (2012) – Occurrence of type A, B and D trichothecenes in barley and barley prod-ucts from the Bavarian market. Mycotoxin Res, 28(2)_97-106

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2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为900 nmol/mL600 nmol/mL 300 nmol/mL150 nmol/mL75 nmol/mL)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟

4. 配液:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048T20倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物请避光保存。

7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

 

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD      

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      

倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD      

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      

倍数,即为样品的实际浓度。                  

  

                                              

 

(此图仅供参考)

 

 

 

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批见应分别小于9%15%

           

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月