细胞内PH值在许多细胞生命活动中发挥着重要作用，例如细胞生长，钙离子的调控，胞吞作用，趋化性，细胞粘合和其它细胞活动。BCECF被广泛地用于细胞内pH的测定。Tsien博士和其他人通过加入2个额外的羧化物基团改进了这种羧基荧光素。加入的两个羧基使得它能更好地被固定在细胞内。BCECF具有很好的水溶性，是因为它在中性pH时带有4到5个负电荷。但是BCECF却很难穿过细胞膜进入到细胞内。它的pKa值为6.97，高于其它的羧基荧光素。BCECF在激发光谱439 nm处有等吸收点，因此它能和Fura 2一样可用比率法测定。505 nm和439 nm通常是非常有用的用于比率测量的波长，一般会将490 nm和450 nm的滤光片加在激发光源的前面。而530 nm的滤光片则是用来查看它的荧光信号的。这里要注意的是，激发光谱与吸收光谱有一些细微的区别。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF。它能够轻易地进入到细胞内。就和其他的乙酰甲酯类一样，BCECF-AM只需要通过孵育就能进入细胞。