英文名称： Cell Counting Kit
产品简介：
Cell Counting Kit 简称CCK 试剂盒，为MTT 法的替代方法，是一种基于WST（水溶性
四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐）的广
泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK 用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
操作说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2 比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5 个细
胞浓度梯度，每组3-6 个复孔。
细胞计数方法 MTT 法 XTT 法 WST-1 法 CCK 法
形成的formazan 的
水溶性
差 好 好 好
产品性状 粉末 2 瓶溶液 溶液 1 瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 现配现用 无需预制 无需预制
检测灵敏度 高 很高 很高 高
检测时间 较长 较短 较短 最短
检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
细胞毒性
高，细胞形态完全消
失
很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差 一般 很好
大批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷
3、接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加CCK 试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一
条以细胞数量为横坐标（X 轴），OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以
测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的
接种数量以及加入CCK 后的培养时间。）
二、细胞活性检测
1、在96 孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2
的条件下）。
2、向每孔加入10 μL 的CCK 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液
或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生
变化。
三、细胞增值-毒性检测
1、在96 孔板中配置100μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时（在37℃，5% CO2
的条件下）。
2、向培养板加入10μL 不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或48 小时）。
4、想每孔加入10μL CCK 溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
6、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。
7、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液
或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生
变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，
并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情
况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
备注：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK 试剂后的培养时间。
②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK 试剂时，建
议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD 值读数。
③白细胞可能需要培养较长时间。
④当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测
白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使
用24 孔板或6 孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入
CCK 溶液。
⑤如果没有450nm 的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm 滤光
片的检测灵敏度最高。
⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会
对检测造成影响。
活力计算：
细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0 加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0 加药）：具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
保存条件：
4℃干燥避光保存，有效期一年。