兔外周血造血干细胞分离液
型号:null    产品货号： LGS1090W
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 天津
试剂级别： 试剂级

1. 适用于各种动物血液 适用于各种动物血液 于各种动物血液及骨髓本系列产品检索：：：：A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在 18℃-25℃避光保存，启封后置 4℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于 10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。B． 待分离的样本要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在 20℃水浴箱中复温 20 分钟保证分离液和所分离样本温度在 20℃±2℃时分离效果最好，且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。C． 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。D． 最好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。E． 最优抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积。 F． 分离过程中所用其他试剂如：羟乙已基淀粉 550、全血及组织稀释液、细胞洗涤液及红细胞裂解液等以我公司产品为最优选择，本公司相关系列产品无菌、无病毒、无支原体、低内毒素水平且无细胞毒性，所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。4. .. 应 4. 用适用于从动物血液或骨髓中分离干细胞。5.. . . 产品性能指标pH 7.0-7.5 渗透压 280-340mOsmol/kg 内毒素 ≤0.5...EU/ml无菌 直接接种培养 14 天后培养基澄清 澄明度及不溶性颗粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下6.. . . 贮藏及保存期限 贮藏及保存期限18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置 4℃保存，有效期一周。 注：：：：若保证无微生物污染，启封后可置 4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。7. .. 实验前准备 7. 实验前准备A． 试剂干细胞分离液、全血及组织稀释液、细胞洗涤液、羟乙已基淀粉 550、胎牛血清B． 器材玻璃离心管、玻璃滴管水平转子离心机、无菌工作台8.. . . 使用方法说明及图例 使用方法说明A.Ⅰ. 取新鲜抗凝血液或脐带血与羟乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）按 1:1 比例混合， 37℃反应 5-10 分钟（5ml 以下样本反应 5 分钟，5ml 以上样本反应 10 分钟）； Ⅱ. 取新鲜抗凝骨髓，加入一份细胞洗涤液（Cat#：2010X1118），混匀后以 400g（约 1500 转/分）离心 5 分钟，弃去上清。沉淀与羟乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）按 1:1 比例混合，37℃反应 5-10 分钟（5ml 以下样本反应 5 分钟，5ml 以上样本反应 10 分钟）； B. 加入为步骤 A 中所得混合液 1/2 体积的全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）混匀 20℃-30℃自然沉降 20-30 分钟，吸取上清备用； C. 向步骤 B 中所得上清液中加入为其一倍以上体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）混匀，以 500g（约 1800 转/分）离心 15 分钟（半径 15cm 水平转子），弃去上清保留沉淀细胞； D. 向细胞沉淀中加入全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）调整细胞浓度为 2×1081×109个/ml，小心叠加于细胞分离液之液面上（混合液：分离液=2:1）； E. 以 400g（约 1500 转/分）离心 20 分钟（半径 15cm 水平转子）； 此时，离心管中由上至下分为四层：第一层；为稀释液层。第二层；为环状乳白色含所需干细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为极少数红细胞层。收集第二层细胞放入约为其 5-10 倍体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）中，充分混匀后以 500g（约 1800 转/分）离心 15 分钟。沉淀经反复洗涤 2 次既得所需干细胞。 F. 为获得纯度更高的干细胞，在步骤 E 中离心完成后可吸取第二层干细胞层再与羟乙已基淀粉 550（Cat#aaa：：：：HES----TBD550）按 1:1 比例混匀，20℃-30℃自然沉降 20-30 分钟，收集上清。只能用于科学研究，不能用于临床检测血小板 100-300×109/L（10 万-30 万个/mm3) 名称                                                         占白细胞总数百分比嗜中性粒细胞                                                 30%-70% 嗜酸性粒细胞                                                 0.5%-5% 嗜碱性粒细胞                                                0%-1% 淋巴细胞                                                    20%-40% 白细胞分类计数单核细胞                                                    3%-8% 干细胞                                                    约占外周血细胞数量3%

凼强傻菪郧沤咏峁剐纬傻慕峁纱蟮� HES-TBD550（羟乙已基淀粉 550）分子处在红细胞之间联接而成。HES-TBD550（羟乙已基淀粉 550）同时还阻碍白细胞和内皮细胞的黏附，并使平均血小板容积呈现微弱地降低，从而有轻度抑制血小板集聚的功能。脐血经 HES-TBD550（羟乙一基淀粉 550）处理后，可使红细胞沉积至试管底，对其它主要成分包括干细胞无影响。经这样处理后，实验时间相对较短（平均为 1.5 h），步骤相对较少，细胞污染几率小，从而使细胞数损失减少。结论证明，与相应的干细胞分离液联合分离使用羟乙已基淀粉沉淀法是一种高效的脐血干细胞分离方法。10.. . . 组织单细胞悬液的制备注：：：：A.. .. 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法，，，，酶消化法由于各实验室选取的消化 酶消化法由于各实验室选取的消化酶种类各不相同，，，，请各实验室自行选择进行试验 请各实验室自行选择进行试验 请各实验室自行选择进行试验。。。。 B. .. 全过程及所需试剂要求无菌环境 B. 全过程及所需试剂要求无菌环境 全过程及所需试剂要求无菌环境。。。。 剪碎法：：：：将组织块放入平皿后，加入少量组织匀浆液及 20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入 5ml 组织匀浆液及 20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用 100 目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内；离心沉淀 1500转/分×3 min，再用细胞洗涤液清洗 3次，每次以 500rpm短时低速离心除去细胞碎片，以 200 目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用 20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为 2×108-1×109个/ml 的单细胞悬液备用。 匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入 70ml 组织研磨器内，加入 2ml 组织匀浆液及 20% 匀浆器法胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用 5ml 组织匀浆液及 20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经 200 目不锈钢滤网（另购）过滤；离心沉淀 800rpm×2min ，再用细胞洗涤液洗 3 次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用 20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为 2×108-1×109 个/ml 的单细胞悬液备用。 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。 计数与计算过程 1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。 3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。 4）、按下式计数细胞悬液的密度： 细胞密度＝（4 个大格细胞总数/4）×104个/ml×稀释倍数 公式中乘以 104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3细胞计数要点： 细胞计数要点：：： A． 进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于 104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到 2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200 个/10mm2或>500 个/10 mm2 时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。 B． 要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。 C． 取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确； D． 数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。 E． 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。 初学者易犯的错误： 初学者易犯的错误：：： A． 计数前未将待测悬液吹打均匀。 B． 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。 C． 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。