马肿瘤浸润组织白细胞分离液试剂盒
型号:null    产品货号: WBC1094Z
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: 天津
试剂级别: 试剂级

外周血白细胞【检验原理】 本分离液为 FICOLL、*** 550 与泛影酸葡甲胺的混合液。抗凝血液可在分离液中分层。离心时,在 FICOLL、***的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降;此时,白细胞仍处于分离液上层及分离液层,红细胞污染可通过红细胞裂解液裂解红细胞去除。大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。其他人及动物多种比重细胞分离液,因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。【必备但不提供的仪器及耗材】 可提供 400g 离心力的水平转子离心机、15ml 玻璃离心管、吸管等。外周血白细胞【注意事项】 1. 使用前,本分离液需复温至 18-22℃。为获得最佳的实验结果,最好在取血后 2 小时内进行实验,血液提取后存放时间越长细胞活性越低。2. 实验过程中,如需稀释血液或洗涤细胞,不可使用含 Ca、Mg 离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度。本公司生产的全血及组织稀释液和细胞洗涤液不含 Ca、Mg 离子、低内毒素水平且含细胞和保护成分,推荐使用。3. 最优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素,其他抗凝剂也可使用,但会影响细胞活性。应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。4. 当血液样本粘度过高或血液样本大于等于 3ml 时,最优稀释方法:将血液于 18-22℃以250g 离心 10 分钟,弃去血浆,补充添加全血及组织稀释液(产品编号:2010C1119),添加量为所弃去血浆体积的 1.5-2 倍,混匀备用。注:不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。5. 实验操作时,不可使用含粉手套、不可使用内毒素含量过高的液体,手套中的粉末颗粒及高内毒素会激活细胞从而降低细胞得率及活性。6. 本实验不可使用高聚合材质(如聚***乙烯)的塑料制品,其带有的静电作用将导致细胞贴壁影响分离效果。7. 吸取过多的白细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。8. 吸取过多的白细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。9. 如需进行细胞计数,则需血液贮藏时间不得多于 10 小时,否则将导致细胞被激活,得率降低。10. 为去除所混杂的血小板,可在分离液上层加上 4-20%蔗糖梯度等渗溶液进行二次离心。11. 细胞纯度可在步骤 10 后使用瑞氏染色方法确定,细胞活性可用台盼蓝处理后观察。 

机械匀浆制备单细胞悬液的方法,,,,酶消化法由于各实验室选取的消化 酶消化法由于各实验室选取的消化酶种类各不相同,,,,请各实验室自行选择进行试验 请各实验室自行选择进行试验 请各实验室自行选择进行试验。。。。 B. .. 全过程及所需试剂要求无菌环境 B. 全过程及所需试剂要求无菌环境 全过程及所需试剂要求无菌环境。。。。 剪碎法::::将组织块放入平皿后,加入少量组织匀浆液及 20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪至匀浆状,加入 5ml 组织匀浆液及 20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用 100 目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内;离心沉淀 1500转/分×3 min,再用细胞洗涤液清洗 3次,每次以 500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以 200 目不锈钢滤网(另购)过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用 20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为 2×108-1×109个/ml 的单细胞悬液备用。 匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入 70ml 组织研磨器内,加入 2ml 组织匀浆液及 20% 匀浆器法胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨至匀浆;用 5ml 组织匀浆液及 20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经 200 目不锈钢滤网(另购)过滤;离心沉淀 800rpm×2min ,再用细胞洗涤液洗 3 次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×107个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用 20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为 2×108-1×109 个/ml 的单细胞悬液备用。 细胞计数方法: 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行?既可用于分离(散)细?培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。 计数与计算过程 1)、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 2)、用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。 3)、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。 4)、按下式计数细胞悬液的密度: 细胞密度=(4 个大格细胞总数/4)×104个/ml×稀释倍数 公式中乘以 104因为计数板中每一个大格的体积为: 1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3而 1ml=1000mm3细胞计数要点: 细胞计数要点::: A. 进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于 104个/ml,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中;显微镜下计数时,遇到 2 个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数<200 个/10mm2或>500 个/10 mm2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。 B. 要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。 C. 取样计数前,应充分混匀细胞悬液,尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀,以求计数准确; D. 数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计左线,不计右线。 E. 操作时,注意盖玻片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。 初学者易犯的错误: 初学者易犯的错误::: A. 计数前未将待测悬液吹打均匀。 B. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。 C. 滴入悬液时的量太多,至使细胞悬液流入旁边的槽中。 11.. . . 生产企业12.. . . 参考文献[1] Meier C, Middelanis J, Wasielewski B, et al. Spastic paresis after perinatal brain damage in rats Is reduced by human cord blood mononuclear cells[J]. Pediatric Research, 2006,59(2):244-249. [ 2] Boyle AJ, Schulman SP, Hare JM , et al. Stem cell therapy for cardiac repair:ready for the next step[J]. Circulation, 2006, 114(4):339-352. [3] 程范军,邹 萍,杨汉东,等.人脐血间充质干/ 祖细胞诱导为心肌样细胞的实验研究[J]. 中华器官移植杂志,2003,24:220-222. [4]Dennis JE,Charbord P.Origin and differentiation of human and murine stroma [J].Stem Cells,2002,20(3):205. [5] Yu JC, Daniel TS, Ching PT, et al. Disparate mesenchyme-lineage tendencies in mesenchymal stem cells from human bone marrow and Umbilical Cord Blood[J]. Stem Cells, 2006,24(3) : 679-685. [6] Compagnoli C, Roberts IAG, Kumar S, et al. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first trimester fetal blood, liver and bone marrow[J]. Blood, 2001,98:2396-2402. [7] Miura M, Gronthos S, Zhao M, et al. SHED: stem cells from human exfoliated deciduous teeth[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2003,100:58075812. [8] 迟作华, 张 洹, 何冬梅, 等. 脐血间充质干细胞培养条件的优化[J]. 中国实用内科杂志,2006, 26(5):372-375. [9] 向 静, 江德鹏, 王昌铭,等. 脐血单个核细胞体外培养和诱导后神经干细胞标志物mRNA 的表达[J]. 重庆医科大学学报,2005 ,30 (3):352-355. [10] 孙海梅,季凤清,李荣平,等.不同培养条件下人脐血间充质干细胞的差异[J]. ***,2006, 10( 45 ):51-53. [11] 朱美玲,伍新尧,陈汝光,等.不同分离方法分离脐血造血细胞效率的比较[J]. 中国输血杂志,2002 , 15 (3):179-780. [12] 郑德先,吴克复,褚建新.现代实验血液学研究方法与技术.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1999. [13] 鄂征.组织培养.北京出版社,1995. [14] 朱立平,陈学清.免疫学常用实验方法.人民军医出版社,2000.血管内皮细胞分离液试剂盒产品价格仅供参考,如有变化敬请谅解!如有疑问请联系我们的工作人员!