mbchemBrand,null 产品货号： M3023Item#, Annexin V-EGFP/PI双染细胞凋亡检测试剂盒<br>英文名称： Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit

一、概述

Mbchem™ Annexin V-EGFP/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒可以方便快捷的检测细胞凋亡情况，使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测

l 方便：可用流式细胞术或荧光显微镜检测；

l 快速：1 小时内即可完成实验；

l 准确：能准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞，并计数各群细胞的比例。

本试剂盒适用于检测活细胞，不适用于检测组织样本

二、产品简介

细胞凋亡普遍存在于生物界，既发生于生理状态下，也发生于病理状态下。细胞凋亡对胚胎发育及形态发生（morphogenesis）、组织内正常细胞群的稳定、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒时引起的细胞损伤、老化、肿瘤的发生进展起着重要作用。

在正常细胞中，***脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35.8KD的Ca2+依赖性***脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。本试剂盒采用重组人Annexin V-EGFP 融合蛋白作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生

***化丙***(Propidine Iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来(图1)

三、试剂盒组分

组分编号		M3021-1 25 assays	M3021-2 50 assays	M3021-3 100 assays	M3021-4 400 assays
Annexin V-EGFP	M3033	125μl	250μl	500μl	2ml
1×Binding Buffer	M3036-1	10 ml	20 ml	40ml	160ml
Propidium Iodide染色液	M3032	250μl	500μl	1ml	4ml
用户手册	——	1份	1份	1份	1份

n Annexin V-EGFP：rh Annexin V由E.coli表达, 20μg/ml储存在Tris-HCl (20mM), NaCl(50mM) 缓冲液中，含1mg/ml BSA。

n 1×Binding Buffer: Hepes(10 mM) /NaOH (pH 7.4), NaCl (140 mM), CaCl₂，(2.5 mM). 经0.2 μm孔径过滤器除菌。

n ***化丙***染色液: 25 μg/ml 溶于PBS (pH7.4)中。

注意：

1、Annexin V-EGFP和***化丙***染液应该避光存放和使用。

2、***化丙***有毒，应小心保存和使用，注意个人保护。

四、保存条件

试剂盒所有组分2-8℃避光保存，保质期一年。生产日期请见包装

五、试剂盒以外自备试剂和仪器

v PBS

v 蒸馏水或去离子水

v 分离收集细胞用的离心机

v 流式细胞仪或荧光显微镜

v 微量移液器

六、操作步骤

ü 操作注意事项

Ø 由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程，因此我们建议您最好在着色后立即进行分析。

Ø 操作过程中应该带上橡胶或一次性手套，避免接触皮肤

Ø 对可能产生污染的器皿/试剂进行清洗并做灭菌处理，最好的方法是在121.5°C高压灭菌1小时。

Ø 如果您需要固定细胞，请在固定前先将细胞与Annexin V-EGFP进行孵育，并用Annexin V-EGFP结合液洗掉未结合的Annexin V。因为固定产生的细胞碎片可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。

Ø 如果细胞样品中含有血小板，如血液样品，请使用含有EDTA的缓冲剂并200×g离心洗去血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。

Ø 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

Ø 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

Ø Annexin V-EGFP 和Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。

Ø 成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS 的密度、发生凋亡时PS 翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功与否至关重要。