Hermanson, G.T. (2008). Bioconjugate Techniques, 2nd ed., Elsevier Inc., pp.114-118, 125. (Product # 20036)

 

• 与巯基基团形成共价键

• 质谱级别（高纯度）

• 方便，一次性使用形式（3个微型管，每管含有9.4mg）

• 当用132μl碳酸氢铵（ammonium bicarbonate）溶解时，每管产生375mM的溶液

• 结合Thermo Scientific Halt***酸酶抑制剂混合剂，DTT，TCEP，MS级别蛋白酶和MALDI基质使用，在MS工作流程中有效

• 在弱碱性pH值条件下，快速并特异地S-羧甲基化巯基（还原的半胱氨酸）

• 在低pH值条件下特异地羧甲基化甲硫氨酸

• 在高pH条件下可能羧甲基化组氨酸和赖氨酸

Cheng, J-W. (1976). Biochem. J.159, 71-77.

Crestfield, A.M., et al. (1963). J. Biol. Chem.238, 622.

Hermanson, G.T. (2008). Bioconjugate Techniques, 2nd ed., Elsevier Inc., pp.109-111. (Product # 20036)

Meridith, M.J. (1983). Anal. Biochem.131, 504-509.

Nemori, R., et al. (2005). J. Histochem. Cytochem.53, 1227-1234.

Winkler, G., et al. (1987). J. Gen. Virol.68, 2239-2244.

• 将-SH基团转化为-S-S-CH3

• 液体，密度为1.337（10M，~150μl）

• 可与胺反应的试剂，含有隐蔽的羧基基团

• 将氨基基团转化为羧基基团

• 在pH9.5的***酸缓冲液中暴露羧基基团

• 反应基团：N-羟基琥珀酰亚胺酯和甲酯

• 反应指向：氨基基团

•在pH6.5-7.5条件下与巯基基团形成共价键

•通过测量300nm处吸光度的下降可以对反应进行监测

Partis, M.D., et al. (1983) J. Prot. Chem.2(3), 263-277.

        制备可与胺反应的N-羟基琥珀酰亚胺酯标记和交联试剂的基础是用N-羟基琥珀酰亚胺和碳化二亚胺去修饰羧化物（见图示）。碳化二亚胺，例如水溶性的Thermo ScientificEDC（产品货号22980）或溶于有机溶剂的Thermo ScientificDCC（产品货号20320），将激活羧化物基团。生成的o-酰基异脲酯（o-acylisoureaester）直接作用于伯胺，但是这种形式在纯化和储存时不够稳定，需要交联过程中的羧化物和胺组分反应同时完成。向碳化二亚胺与羧化物的反应中添加N-羟基琥珀酰亚胺（或N-羟基硫代琥珀酰亚胺），可以使o-酰基异脲酯中间体被N-羟基琥珀酰亚胺所取代。N-羟基琥珀酰亚胺酯同时也被水解，其稳定性足以允许将活化的分子纯化和冻干用以后续的与含有胺的目标分子交联

• 增加EDC介导的偶联反应的有效性

• 在任意含有羧基的分子上产生可与胺反应的N-羟基琥珀酰亚胺酯

• 高纯度，结晶性的N-羟基琥珀酰亚胺可以用于产生高纯度活化的衍生物

• N-羟基琥珀酰亚胺衍生物可通过干燥使其稳定，允许制造可与胺反应的探针和表面

 应用：

• 提高EDC偶联反应效率

• 将反应分成两步以控制羧基到胺的交联

• 将羧基转化为可与胺反应的N-羟基琥珀酰亚胺酯的标记试剂

• 将蛋白质交联于羧基包被的球珠或表面

• 活化羧基化的纳米颗粒使其可与胺反应