• 与伯胺反应添加保护性巯基

• 简单的脱保护步骤即可产生游离的巯基

• Thermo Scientific巯基添加试剂盒包含硫醇化作用，脱保护，纯化和定量所有需要的组分

使用SATA进行蛋白质巯基修饰的反应方案。SATA的N-羟基琥珀酰亚胺酯与赖氨酸残基上的伯胺反应。SATA修饰的蛋白质可以保存以备日后使用。需要时，巯基基团可以通过羟胺（产品货号26103，见第371页）的处理得到暴露。

Duncan, R.J.S., et al. (1983). Anal. Biochem.132,68-73.

 

SAT（PEG）4扩展了用于含胺分子巯基修饰的S-乙酰基硫代硫酸盐（S-acetylthio，SAT）试剂的柔性，溶解性和延伸性。SAT（PEG）4与SATA和SATP具有相同的形式（如上所示），它们作为蛋白质交联策略的一部分被广泛应用。使用SAT试剂修饰一种蛋白质，另一种蛋白质用马来酰亚胺活化的交联剂，例如Sulfo-SMCC（产品货号22322）修饰后，两种纯化的蛋白质（例如，抗体和酶）可被交联。由于SAT试剂可以添加一个保护性的巯基，因此在将其处理以暴露巯基并且进行最终巯基定向的交联反应之前，被修饰的蛋白质可以无限期地储存。相对于SATA和SATP，SAT（PEG）4中四个单元的聚乙二醇（PEG）基团提供了增加的亲水性和间隔臂长度。当与含有PEG的长臂交联剂如SM（PEG）12（产品货号22112）结合使用时，SAT（PEG）4可以以长间隔交联蛋白质。

 产品特点：

• 与伯胺反应添加保护性巯基

• 简单的脱保护步骤即可产生游离的巯基

• 水溶性聚乙二醇（PEG）间隔臂增强了被标记蛋白质的溶解性

         制备可与胺反应的N-羟基琥珀酰亚胺酯标记和交联试剂的基础是用N-羟基琥珀酰亚胺和碳化二亚胺修饰羧化物（见图示）。碳化二亚胺，例如水溶性的Thermo Scientific EDC（产品货号22980）或溶于有机溶剂的Thermo ScientificDCC（产品货号20320），将激活羧化物基团。生成的o-酰基异脲酯（o-acylisoureaester）直接作用于伯胺，但是这种形式在纯化和储存时不够稳定，需要交联过程中的羧化物和胺组分反应同时完成。向碳化二亚胺与羧化物的反应中添加N-羟基硫代琥珀酰亚胺（或N-羟基琥珀酰亚胺），可以使o-酰基异脲酯中间体被N-羟基硫代琥珀酰亚胺所取代。N-羟基琥珀酰亚胺酯同时也被水解，其稳定性足以允许将活化的分子纯化和冻干，用于后续的与含有胺的目标分子交联。N-羟基琥珀酰亚胺（产品货号24500）和N-羟基硫代琥珀酰亚胺本身均为水溶性，但是由这两种试剂制成的N-羟基琥珀酰亚胺酯对于它们修饰的羧化物化合物的溶解性的影响有所不同。N-羟基琥珀酰亚胺酯基团并不给予活化分子溶解度，事实上相对于原始的含有羧化物的分子，它可能会降低其溶解度。然而，由于含有带电的巯基基团，由N-羟基硫代琥珀酰亚胺形成的酯可以保持或增加活化分子的水溶性。当活化那些以羧基基团作为溶解度主要基础的小化合物，这一对于溶解度的效应将尤为显著。

• 增加EDC介导的偶联反应的有效性

• 在任意含有羧基的分子上产生可与胺反应的N-羟基硫代琥珀酰亚胺酯

• N-羟基硫代琥珀酰亚胺为水溶性，因此交联可以在生理的溶液中进行

• 高纯度，结晶性的硫代N-羟基琥珀酰亚胺可以用于产生高纯度活化的衍生物

• N-羟基硫代琥珀酰亚胺衍生物可通过干燥使其稳定，允许制造可与胺反应的探针和表面

• 提高EDC偶联反应效率

• 将反应分成两步以控制羧基到胺的交联

• 将羧基转化为可与胺反应的N-羟基硫代琥珀酰亚胺酯的标记试剂

• 将蛋白质交联于羧基包被的球珠或表面

• 活化羧基化的纳米颗粒使其可与胺反应

使用N-羟基硫代琥珀酰亚胺促进EDC介导的羧化物和伯胺之间交联的反应方案。当使用N-羟基硫代琥珀酰亚胺时，会产生N-羟基琥珀酰亚胺酯，它可以通过干燥稳定并在以后的某一时间与伯胺分子反应。

• pH7或更高pH条件下主要与伯胺（赖氨酸ε氨基基团）反应

• 测试赖氨酸残基在蛋白质功能中的重要性

• 通过释放N-羟基硫代琥珀酰亚胺完成不可逆的反应

 参考文献

Engstler, M., et al. (2004) J. Cell Sci.117,1105-1115.