ProteoExtract Albumin Removal Kit, Maxi
型号:null    产品货号: 122641-1KIT
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: 德国

潜在疾病标志物的最好样本来源就是血清或其他体液,此类样本可以提供人蛋白质组中绝大部分组份。然而,用蛋白质组分析方法鉴定疾病标志物最大的挑战来自于血清中大量的高丰度蛋白对检测的干扰,血清中有大约55%的蛋白为白蛋白,而IgG大约占血清中蛋白总量的10-25%,这些高丰度蛋白的存在会增加低丰度蛋白检测的难度,去除占血清总蛋白近75%的白蛋白和IgG将有助于更好地鉴定其他的蛋白。 MERCK最新推出的ProteoExtract?高丰度蛋白去除试剂盒可以从体液如血浆或血清中高效、特异性地除去白蛋白、或同时除去白蛋白和IgG,从而显著降低样品的复杂性,利于低丰度蛋白的检测。被除去的血清白蛋白和IgG占其总蛋白的75%,从而使得剩余的样品可以浓缩3-4倍上样,用于SDS-PAGE凝胶电泳、2D凝胶电泳或液相色谱分离。 主要特点: · 快速 ,只需20-30分钟; · 简单 ,基于纯化柱式的操作方法,可平行处理多个样品。 · 高效 去除白蛋白和IgG,利于检测低丰度蛋白; · 高特异性 、非特异性结合很少或没有; · 2D电泳或LC使用的上样样品可以更加 浓缩 ; 快速操作流程: 一、样本处理:   取30-60ul血浆/血清,以结合缓冲液(Binding      Buffer)十倍稀释 二、分离柱准备:   a、除去柱子上的盖子,以纸吸去贮存缓冲液   b、除去柱底部的尖咀,放入大小适合的收集管   c、加入结合缓冲液,让其靠重力流过柱体   d、将柱子放入一个新的大小适合的收集管中 三、白蛋白/IgG去除   a、加入稀释后的样本,让其靠重力流过柱体   b、以600ul结合缓冲液清洗柱体   c、再次以600ul结合缓冲液清洗柱体 收集a、b、c三步的洗脱组份,即为去除白蛋白 /IgG后的样本 相关产品: 1、ProteoExtract? Albumin Removal Kit Cat. No.: 122640 Size: 12 columns/Kit 试剂盒中提供: 1. ProteoExtract? Albumin Removal 2. ProteoExtract? Albumin Binding Buffer 3. 说明书 4. 简明操作流程表 样本类型: 血清、血浆、脑脊液 试剂盒贮存条件: 4OC,不可冷冻 试剂盒说明: 本试剂盒基于一种新型的亲和树脂,可高度特异性地与白蛋白结合,从而快速、高度特异性地除去体液(血浆、血清或脑脊液)中的白蛋白,重复性好。可显著降低样品复杂性,利于检测样品中的低丰度蛋白。 每个试剂盒提供12支一次性使用的预装柱,每个柱子吸附量高达2mg白蛋白,可除去人血浆中80%以上的白蛋白(图 1A),而处理后的样品中保留了90%以上的其他标志蛋白如Transferrin、Factor VII和Antithrombin III,图1B显示标志蛋白的免疫印迹结果,并经LC-MS分析捕获的蛋白(结果未显示)验证,非特异性结合很低。试剂盒提供了一种简便的方法以检测低丰度蛋白(图二),并成为分析体液中的疾病标志蛋白的有效工具 本试剂盒已经针对人血清样本作了特别优化,但使用同样的操作步骤,也适用于兔、大鼠或小鼠血清/血浆样品中白蛋白的去除 使用ProteoExtract Albumin Removal Kit 试剂盒除去35ul人血浆中的白蛋白(按建议操作步骤)。取每个组分各15ug蛋白进行SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色。对各条带的密度分析表明试剂盒可除去典型血浆、血清样品中超过80%的白蛋白。 图中各组分电转至PVDF膜上,以三种标志蛋白(transferrin,antithrombin III,factor VII)的抗体进行检测。除去了白蛋白的穿过组分中包含超过95%的标志蛋白,表明ProteoExtract Albumin Removal Kit的非特异性结合很少。 更详细信息 :http://www.proteoextract.com/ 或与我们联系免费电话: 800-820-8872 Email: bioteam@merck-china.com   ProteoExtract Albumin Removal Kit可帮助检测到此前无法显示的多种蛋白 比较未经本试剂盒处理的人血清(Fig. 2A)和使用试剂盒除去白蛋白的人血清的电泳结果图。二者分别直接采用35ul人血清或经ProteoExtract Albumin Removal Kit处理,取0.5mg样品经沉淀、重溶于IEF缓冲液,进行2DGE电泳,考马斯亮蓝染色。可见未处理样品中高丰度的白蛋白会影响掩盖其他蛋白(Fig. 2A),除去白蛋白则使得先前未能检测到的一些蛋白得到显示 (Fig. 2B) 2、ProteoExtract? Albumin/IgG Removal Kit Cat. No.: 122642 Size: 12 columns/Kit 试剂盒中提供: 1、 ProteoExtract? Albumin/IgG Removal 2、 ProteoExtract? Albumin/IgG Binding Buffer 3、 说明书 4、 简明操作流程 样本类型:    血清、血浆、脑脊液 试剂盒贮存条件:    4OC,不可冷冻 试剂盒说明: ProteoExtract Albumin/IgG Removal试剂盒可以用于快速、简便和高度特异性地去除体液(血浆、血清或脑脊液)中的血清白蛋白和IgG。试剂盒提供的重力自流式纯化柱含亲和树脂混合物,从而可以同时除去样品中80%的白蛋白和IgG。 试剂盒提供的亲和树脂专为高效特异性地结合血清白蛋白和IgG而设计。经免疫印迹和LC-MS捕获蛋白分析(结果未显示)验证,该树脂对其他血清、血浆蛋白的非特异性结合很低(见下面相关图A、B)。为检验树脂结合白蛋白和免疫球蛋白的特异性,以免疫印迹检测了未结合、结合树脂组分中的标志蛋白。树脂包含白蛋白结合树脂和免疫球蛋白A结合树脂,基于两种目的蛋白的洗脱条件不同,可以分别洗下80%以上的白蛋白和IgG(经densitometric analysis分析1D电泳条带,见下面相关图 C)。 M:蛋白MARKERs; P:15ug人血浆蛋白; F:15ug穿过组份蛋白; E:15ug洗脱组份蛋白 取35ul人血浆按操作流程处理后每组份取15ug蛋白,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色后经光密度分析可知,使用本试剂盒可以去除样品中80%以上的血清白蛋白及 IgG 2D电泳比较未除去白蛋白和IgG样品与除去这两种蛋白的样品电泳效果差异: 图 D:采用未经处理人血浆样品;图E:使用ProteoExtract Albumin/IgG Removal Kit除去白蛋白和IgG的人血浆样品。当样品中高丰度的白蛋白和IgG被试剂盒除去后,使得多种先前未能显示的蛋白被检测出来

960.00元

 

说明:分离试剂,层析介质。分离范围:1000-30,000

化学和物理性质:

葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶液中溶胀。 G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。 葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程,可在较低的压力下获得较高的流速。 另外,粗级也可用于批量工艺。

化学稳定性:

葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。 它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的,在强酸中凝胶骨架的糖昔键被水解。 长期接触氧化剂将破坏凝胶,因而应避免使用。

物理稳定性:

葡聚糖疑胶并不熔融,可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120、30分钟而不影响它的色谱性质。 干态的凝胶加热至120以上将开始焦糖化。 葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。

使用方法:

1. 葡聚糖凝胶预处理:

在室温下,将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,或者用蒸馏水煮沸至少1小时直至充分溶胀,凝胶体积不再变化。

注:在溶胀前,加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降,沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多,需要重复多次漂洗将其除去,防止层析时阻塞凝胶柱,影响流速。

2. 装柱:

将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层; 装柱要均匀,可在凝胶耐受的操作压下装柱,装好的凝胶柱可以检测柱效,检测过滤柱装填是否合格。

凝胶层析分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度:分级分离时,一般需要 100cm 左右长的层析柱,柱高与直径之比为 20:1-100:1,柱高过高时,凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压,应当尽可能避免;分组分离(例如脱盐)时用短柱,柱高控制在40-50cm 以下,柱高与直径的比约为 5:1-10:1

3. 平衡:

上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

4. 上样:

分级分离时上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积。

样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去,样品的粘度不能过高,否则影响分离效果。

5. 洗脱方法:

可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;

6. 在位清洗(CIP)

凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。 方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向清洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

7. 保存

凝胶柱暂时不用,可将其回收,一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干,可加入0.02%叠氮化钠防腐或用20%乙醇浸泡,以控制微生物生长。

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