Tris-HCl SDS-PAGE分离胶配胶液(4×)
英文名称： Tris-HCl SDS-PAGE
型号:null    产品货号： SF0045
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 中国
试剂级别： 试剂级

 

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1        
I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表2）        
1. 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。        
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据        
    实际情况选择。        
2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。        
3.加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。         
4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端        
  1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使        
  凝胶表面保持平整。        
5. 静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。        
II 灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表3）        
1.去除覆盖在分离胶上的水层。        
2. 将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合。        
3. 加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。        
4. 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃的顶端。        
5. 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。        
6. 静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。        
7. 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。        

8.进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围            
SDS-PAGE分离胶浓度     最佳分离范围    
6%胶   50-150kD    
8%胶   30-90kD    
10%胶   20-80kD    
12%胶   12-60kD    
15%胶    10-40kD    
             
附表2.配制Tris-Gly SDS-PAGE分离胶            
分离胶浓度 凝胶体积 所需各组分体积（单位：ml）
双蒸水 30%Acr-Bis（29:1） 分离胶缓冲液（4×） 10%APS TEMED
6% 5ml 2.75 1.0 1.25 0.05 0.004
10ml 5.5 2.0 2.5 0.1 0.008
15ml 8.25 3.0 3.75 0.15 0.012
20ml 11 4.0 5 0.2 0.016
8% 5ml 2.42 1.33 1.25 0.05 0.003
10ml 4.8 2.7 2.5 0.1 0.006
15ml 7.25 4 3.75 0.15 0.009
20ml 9.7 5.3 5 0.2 0.012
10% 5ml 2.08 1.67 1.25 0.05 0.002
10ml 4.17 3.33 2.5 0.1 0.004
15ml 6.25 5 3.75 0.15 0.006
20ml 8.3 6.7 5 0.2 0.008
12% 5ml 1.75 2.0 1.25 0.05 0.002
10ml 3.5 4.0 2.5 0.1 0.004
15ml 5.25 6.0 3.75 0.15 0.006
20ml 7 8.0 5 0.2 0.008
15% 5ml 1.25 2.5 1.25 0.05 0.002
10ml 2.5 5 2.5 0.1 0.004
15ml 3.75 7.5 3.75 0.15 0.006
20ml 5 10.0 5 0.2 0.008
             
附表3.配制5%Tris-Gly SDS-PAGE浓缩胶            
  凝胶体积 所需各组分体积（单位：ml）
  双蒸水 30%Acr-Bis（29:1） 浓缩胶缓冲液（4×） 10%APS TEMED
  2ml 1.14 0.34 0.5 0.02 0.002
  4ml 2.28 0.68 1 0.04 0.004
  6ml 3.42 1.02 1.5 0.06 0.006
  8ml 4.56 1.36 2 0.08 0.008
             
附表4.配制4%Tris-Gly SDS-PAGE浓缩胶            
  凝胶体积 所需各组分体积（单位：ml）
  双蒸水 30%Acr-Bis（29:1） Buffer C 10%APS TEMED
  20ml 12 2.8 5 0.10 0.08
  30ml 18 4.2 7.5 0.15 0.12
             
附表5.配制Tris-Gly SDS-PAGE分离胶            
分离胶浓度 凝胶体积 所需各组分体积（单位：ml）
双蒸水 30%Acr-Bis（29:1） Buffer B 10%APS TEMED
12% 40ml 13.72 16 10 0.12 0.05
13% 40ml 12.5 17.3 10 0.12 0.05
50ml 15.6 21.6 12.5 0.12 0.05
15% 40ml 9.72 20 10 0.12 0.05
             
附表6.配制Imidazole SDS-PAGE凝胶            
凝胶浓度 凝胶体积 所需各组分体积（单位：ml）
双蒸水 30%Acr-Bis（29:1） Imidazole 10%APS TEMED
4% 22.5ml 16 3 3.5 0.09 0.03
12% 40ml 17.5 16 6.3 0.09 0.05
14% 40ml 15 19 6.3 0.09 0.05
15% 40ml 13.5 20 6.3 0.09 0.05
16% 40ml 12.3 21.3 6.3 0.09 0.05