使用Thermo Scientific Mem-PER 真核细胞膜蛋白抽提试剂盒来溶解和分离酵母膜内蛋白(酿酒酵母菌株EGY-194)。向湿重大10-15mg的细胞沉淀中加入80μlMem-PER 试剂 A和100-150mg、尺寸为405-600μm的酸洗玻璃珠并在室温涡旋10分钟来破裂酵母细胞的细胞壁。短暂离心收集玻璃珠，然后将细胞裂解物转移到新的离心管中并将离心管置于冰上。用720 μl Mem-PER试剂B和C洗涤收集的玻璃珠然后将洗涤液加入到细胞裂解液中并在冰上孵育30分钟。样本进行4-12%Bis-Tris凝胶电泳。

分别对从大鼠肝（图A）和大鼠心（图B）制备的膜蛋白进行蛋白免疫印迹。利用蛋白免疫印迹对通过Mem-PER 试剂制备的疏水（膜蛋白）成分和相应的亲水成分进行分析，分别对VDAC (31 kDa, Affinity BioRegeants),cellugyrin (29 kDa, BDTransduction Laboratories)及flotillin-1 (48 kDa, BD Transduction Laboratories)进行免疫印迹分析。M = 膜蛋白组份，H =亲水组份。

对Thermo Scientific Mem-PER 试剂溶解的蛋白进行分级。使用Mem-PER真核细胞膜蛋白抽提试剂盒对三种细胞系的蛋白进行溶解和抽提。每组疏水（膜蛋白）和亲水组分均通过标准操作获得，利用蛋白质免疫印迹分析四种细胞定位已知的蛋白。利用SDS-PAGE/蛋白质免疫印记分析对COX4进行分析之前，使用SDS-PAGE样品制备试剂盒去除膜组分中的去垢剂。所有碎片组分中检测到的蛋白污染量极低。缩写: AchE = 乙酰胆碱酯酶, COX4 =细胞色素氧化酶4亚基,hsp90 =热休克蛋白90, M = 可溶性膜蛋白组分，H = 亲水性蛋白组分。

 

Chattopadhyay, K., et al. (2006).J. Immunol. 177, 3920-3929

Fujii, N., et al. (2007).Cancer Res. 67, 573-579.

Nurnberger, J., et al. (2002). Mol. Biol. Cell.13, 3096-3106.

Stephano, G.B., et al. (2003). Endocrinology144(4), 1234-1240.

Tu, C-L., et al. (2008).J. Biol. Chem.283,3519-3528.Wojnar, P., et al.

(2003). J. Biol. Chem.278(18), 16209-16215.