使用Thermo Scientific NEPER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒可以在两小时以内分别抽提出胞浆和核蛋白组份。该方法是微量离心管方法，主要步骤包括首先用含有专利去垢剂的低渗缓冲液裂解细胞，然后微量离心以便沉淀完整的细胞核，此后去除胞浆组分，最终裂解细胞核。一般使用该方法所得的细胞质与细胞核组分之间的交叉污染<10%。一般从2x106个细胞中能够抽提出胞浆蛋白200-500μg，细胞核蛋白100-200μg（浓度>1mg/ml）。可以通过改变抽提中所用的核抽提试剂(NER)的量而调整所需要的蛋白浓度而不会影响抽提效率。
从细胞中专一地抽提核蛋白是许多基因调节研究中成功的关键因素。然而目前大多数分离细胞核、制备核蛋白抽提物的方法需时很长并且需要机械匀浆、反复冻融、超速离心或者透析等步骤，而这些步骤很可能会影响到许多脆弱的核蛋白的完整性。NE-PER*试剂盒解决了这些问题，可以得到高质量浓缩的核蛋白抽提物，所得的抽提物可用于EMSA及其它分析技术。
产品特点：
- 快速–在两小时以内获得核组分和胞浆组分。
- 简单–使用台式微量离心机和微量离心管方法，因此不需要繁琐的反复冻融、杜恩斯匀浆、长时间的离心以及低温试验。
- 通用–从同一个组织或细胞样品中即可分别获得其细胞核和细胞质抽提物。
- 相容性强–抽提物可用于蛋白免疫印迹、凝胶阻滞分析、蛋白定量分析、报告基因分析以及酶活性分析等下游应用。
利用Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒从多种哺乳动物细胞系中制备的胞浆组分和核组份的蛋白量。利用Thermo Scientific BCA微量蛋白定量分析试剂盒(产品货号 23235)进行蛋白定量。显示的数值为两次单独分离的平均值。
对HeLa细胞的胞浆及核组分进行蛋白免疫印迹分析，结果显示交叉污染极少。利用4-20% 梯度Tris－甘氨酸变性凝胶对总蛋白量(20μg)相等的四种样品进行电泳。将蛋白转移到醋酸纤维素膜上，用含有3%BSA的Tris缓冲液进行封闭。A. 用抗Oct-1的抗血清(1:400)进行结合，然后利用1:100,000的标记辣根过氧化物酶的二抗进行结合。B. 用抗hsp90的抗血清(1:400)进行结合，然后利用1:50,000的标记辣根过氧化物酶的二抗进行结合。两个分析所用的底物均为用于蛋白免疫印迹的SuperSignal皮克级化学发光底物(产品货号 34080)。
参考文献
Corless,M.,et al.(2006).J. Endocrinol.190,719-727.
Gomes, D.A.,et al.(2008). J. Biol. Chem.2834344-4351.
Lecanda, J.,et al.(2007).Cancer Res.67, 1007-1018.
Liu, O.,et al. (2007). FASEB J. 21,61-73.
Smirnova, I.V.,et al. (2000).J. Biol. Chem.275(13), 9377-9384.
Yamada, N.A. and Farber, R.A. (2002).Cancer Research62, 6061-6064.
Yamada, N.A.et al. (2003).Mutagenesis18(3), 277-282.
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产品货号 | 产品描述 | 包装 | 价格￥ |
78833 | NE-PER 核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒 可抽提50个细胞沉淀样品，每个样品为体积为 20μl的细胞沉淀（共可抽提大约2g细胞沉淀） 包括：胞浆蛋白抽提试剂I(CER I) 胞浆蛋白抽提试剂II(CER II) 核蛋白抽提试剂(NER) | 试剂盒 10ml 550μl 5ml | 2586 |
78835 | NE-PER 核蛋白胞浆蛋白抽提试剂盒 可抽提250个细胞沉淀样品，每个样品为体积为 20μl的细胞沉淀（共可抽提大约10g细胞沉淀） 包括：胞浆蛋白抽提试剂I(CER I) 胞浆蛋白抽提试剂II(CER II) 核蛋白抽提试剂(NER) | 试剂盒 50ml 2.75ml 25ml | 6863 |
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20148 | LightShift*化学发光EMSA试剂盒 | 0 | 3 | 2 |
8 | 1.1 | 0.44 | 1 | 3 |
9 | 1.1 | 0.88 | 2 | 1 |
† 每种基础重折叠缓冲液均以1.1X储备液的形式提供。每种储备液均含有指定浓度的变性剂以及55 mM Tris、21 mM NaCl、0.88 mM KCl，pH为 8.2。
‡ 加入增溶的蛋白样品会额外的引入胍(盐酸胍)。
††研究人员可根据其需要从提供的添加剂中挑选因子3和因子4来制备定制的重折叠条件。表中的数字表明不同添加剂的浓度水平。
产品特点：
- 可靠 – 所检测的条件和成分均为重折叠缓冲液中最常用、最重要的。
- 方便 – 三个水平的矩阵设计明显地降低第二次优化和数据分析的难度。
- 可调节 – 可以按照不同的目标蛋白定制不同的重折叠实验；详细说明了缓冲液成分之间的正向和反向的相互作用，避免了不必要的分析。
- 高纯试剂 – 按照极其严格的标准配制试剂，因此可以获得最稳定的结果。
缓冲液添加剂：
缓冲液添加剂 | 量 | 缓冲液添加剂 | 量 |
聚乙二醇(PEG) ，(10 mM) | 1ml | EDTA (100 mM) | 1ml |
二硫苏糖醇 (DTT) | 100mg | 二价阳离子溶液 | 0.5ml |
还原型谷胱甘肽(GSH) | 120mg | NaCl (5M) | 1ml |
氧化型谷胱甘肽(GSSG) | 100mg | CaCl2 | 0.5ml |
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产品货号 | 产品描述 | 包装 | 价格￥ |
89867 | 蛋白重折叠试剂盒 100个反应/试剂盒 包括：基础重折叠缓冲液 二硫苏糖醇 (DTT) 还原型谷胱甘肽(GSH) 氧化型谷胱甘肽(GSSG) 10 mM 聚乙二醇(PEG) 二价阳离子溶液 5M NaCl 100 mM EDTA 重折叠指南 | 试剂盒 1-9 9 x 10ml 100mg 120mg 100mg 1ml 0.5ml 1ml 1ml | 4424 |
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