超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-20. 1kD) |
型号:null 产品货号: PR1300 |
价格:请致电:010-57128832,18610462672 |
品牌: 北京/中国 |
超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-20. 1kD)说明书 货号: PR1300 规格: 15T (150 μ1) 保存: -20℃保存,有效期为一年。 产品简介: 本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3. 3kD-20. 1kD。 可以用来判断SDS-PAGE 上多肽和小蛋白的分子量。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉,每种蛋白含量约为15-22.5ug,配有一支1× 上样缓冲液。 使⽤说明: 1. 开封后,溶于150 μ1 1×上样缓冲液,于95℃水浴5分钟,可根据需要进行小量分装,每管10 μl,-20℃贮存, 每次取一管使用,避免反复冻融。 2. 使用前取分装后的小管室温融化后,95℃预热5分钟即可上样电泳, 用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋 白带(见下示意图) 。 凝胶的配置⽅法: 分离胶 夹层胶 浓缩胶 20%/4.5ml 16.5%/4.5ml 15.5%/4.5ml 10%/2ml 4%/2ml 49.5%T 3%C / / / 0.407ml 0.160ml 49.5%T 6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml / / 凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml 0.667ml 0.496ml 甘油 0.48ml 0.48ml 0.48ml / / ddH2O 0.70ml 1.02ml 1.125ml 0.926ml 1.344ml 10%APS 40%l 40%l 40%l 20μ| 20μ| TEMED 5%l 5%l 5%l 3%l 3%l 凝胶制备及染⾊注意事项: 1. 先配制分离胶,聚合后再配制夹层胶,最后配制浓缩胶,3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时,30v跑1-2 小时后,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至100v,至电泳结束,整个电泳过程大约需要6-8小时。 2. 由于多肽所含的氨基酸数目较少,因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性),则会影响其在 SDS-PAGE 图上的条带迁移率,即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。 3. 由于SDS-PAGE 的图谱上,蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为15,000-200,000, 因此对于分子量小于10000 的蛋白质或多肽的分子量,只能根据标准分子量进行估计,推断其是否落入预测 的分子量范围。 4. 由于超低分子量多肽(3000 及3000 以下),极易从凝胶上浸出,因此染色及脱色时间不宜太长,脱色后凝 胶也不宜在水中浸泡保存过久,否则条带会消失。 5. 电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如时间不允许,也可不 进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快 速染色液(货号:P1300),该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。 相关产品: P1015 4×蛋白上样缓冲液(含DTT) P1016 4×蛋白上样缓冲液(含β-***) A1030 10%过硫酸氨 T1070 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300-500 考马斯亮蓝快速染色 附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制 1. 49.5% T 3 % C (配制夹层胶和浓缩胶) 丙烯酰胺 48g 甲叉双丙烯酰胺 1.5g 用ddH20溶解后定容至100ml 2. 49. 5 % T 6 % C (配制分离胶) 丙烯酰胺 46. 5g 甲叉双丙烯酰胺 3. 0g 用ddH20溶解后定容至100ml 3. 凝胶缓冲液 Tris碱 182g ddH20 300ml 用HCl调节pH值至8.45 用ddH20定容至 500ml 再加入SDS 1.5g 4 . 10×阳极缓冲液(下槽缓冲液〕 Tris碱 121. 1 g ddH20 400ml 用HCl调pH值至8.9 用ddH20定容至 500ml 5. 阴极缓冲液(上槽缓冲液) Tris碱 12 .11g Tricine 17.92g SDS 1g 用ddH 2 0定容至1000ml 此溶液不用调节pH值 6. 固定液 0.5% 戊二醛 30% 乙醇 用ddH 2 0定容至100ml 7. 染色液 50% 甲醇 10% 乙酸 0.2% 考马斯亮蓝G-250 用ddH 2 0定容至500ml Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 010-56371210 Fax: 010-56371281/82 Http://www.solarbio.cn |