北京/中国Brand,null 产品货号： R0010Item#, 高效RIPA组织/细胞裂解液（买五送一）

高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明书

货号：R0010

规格：20ml/100ml

本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）

保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20 ℃保存。

一、使用说明：

如发现RIPA 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。

1、样品前处理：

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6 孔板每孔细胞量加入

150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul 裂解

液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，

必需分装成50-100 万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg 组织加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解

液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g 离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western

blotting 和免疫沉淀等操作。

二、注意事项：

高效RIPA组织/细胞裂解液为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细

胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若

想测定浓度，可入加少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污

剂，所以不适合使用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA 法或者Lowry 法检测蛋白浓度。

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清

用于后续实验。