HaloTag® Protein Purification System Sample Pack

说明

HaloTag ® Protein Purification System (a–d) （ HaloTag ® 蛋白纯化系统）被设计用于纯化 HaloTag ® 融合蛋白， HaloTag ® 是一种新型蛋白标签，能够增强重组蛋白的表达产率和可溶性。 HaloTag ® 技术能够将目的蛋白以共价结合的形式、高效并特异地捕获到 HaloLink™ 树脂上，这克服了其它使用亲和标签进行蛋白纯化的方法相关的、基于平衡反应的限制因素（例如，低水平表达蛋白的低效捕获和冲洗纯化树脂导致的蛋白流失）。

实验过程概述
HaloTag ® 蛋白是一个 34kDa 的突变水解酶，通过一个被固化的氯化烷配基与 HaloLink™ 树脂发生共价结合。 TEV 蛋白酶可从 HaloLink™ 树脂上将目的蛋白切下。 TEV 蛋白酶具有一个 N 端 HQ 标签，可以使用 HisLink™ 树脂从目的蛋白上去除掉，这样就得到了纯化好的目的蛋白。编码 HaloTag ® 蛋白、并且能在大肠杆菌中达到目的蛋白的最优表达的载体是 pFN18A HaloTag ® T7 Flexi ® Vector (G2751) 或者 pFN18K HaloTag ® T7 Flexi ® Vector (G2681) 。这些载体可以单独购买。

 特点

•  与 His-Tag, GST 和 MBP 亲和标签相比较，本系统产量大、纯度高、能够获得具有功能的可溶性蛋白： HaloLink™ 树脂以共价结合的方式捕获和固定 HaloTag ® 融合蛋白，特异性高。

•  在原核、哺乳动物细胞和无细胞表达系统中，目的蛋白的表达得到增强： 蛋白以 HaloTag ® 融合蛋白的形式表达。

•  纯化表达量少的融合蛋白： HaloLink™ 树脂能快速、特异并且共价捕获 HaloTag ® 蛋白，这是一个非平衡过程。

•  使用 TEV 蛋白酶切割，可高效复原目的蛋白： EV 蛋白酶切割 HaloTag ® 蛋白和融合蛋白之间的连接肽段，其识别位点已经经过优化。

•  节省时间： 仅需一种缓冲液就能兼容的所有纯化步骤。

•  使用 HaloTag ® 荧光配基可轻松实现胶内检测和蛋白表达水平的定量： HaloTag ® 蛋白 - 配基相互作用非常稳定，可以在含有 SDS 的样品缓冲液中煮沸，并可接下来使用 SDS-PAGE 胶分离。

 应用

•  纯化在大肠杆菌中表达的 HaloTag ® 融合蛋白，尤其是那些使用其它方法不易表达的蛋白。
•  纯化在哺乳动物和无细胞系统中表达的 HaloTag ® 融合蛋白。

 操作手册

Technical Manual #TM312

 储存条件

将 HaloLink™ 树脂和 HisLink™ 树脂储存于 4°C 。不要冷冻树脂。将 TEV 蛋白酶储存于 –20°C 。

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