| S9400 Benzamidine Sepharose 4FF 英文名称： Benzamidine Sepharose 4FF | ||||||||||
| 型号:null 产品货号： S9400 | ||||||||||
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 | ||||||||||
| 品牌: 北京市通州区马驹桥联东u谷85a三层 | ||||||||||
北京索莱宝科技有限公司 张净花 010-56371206 13426459985 S9400 Benzamidine Sepharose 4FF品牌：Solarbio | 货号：S9400
***甲脒类物质是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂，所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶上，可以从各 种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。***甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高，非特异吸附少，而且填料粒度均匀，所 以分离效果好，是纯化丝氨酸蛋白酶类最适合的填料。S9400 Benzamidine Sepharose 4FF亲和填料特征：特点：载量大，分辨率好，流速高，使用方便。 基质： 4%的交联琼脂糖凝胶配基：***甲脒配基密度：7μmol /ml吸附载量：13 mg胰蛋白酶/ml填料的颗粒大小：45-165μm最大流速：300cm/hpH范围：3-10，在位清洗时pH范围可到2-11保存温度：+4~8℃保存液体：20%乙醇S9400 Benzamidine Sepharose 4FF适用范围 : 一步从各种样品中纯化丝氨酸蛋白酶类物质。 应用实例: 实验名称：***甲脒琼脂糖凝胶 FF分离尿激酶。 实验步骤： （1） ***甲脒琼脂糖凝胶 FF装柱，1.6×20m，柱床体积为10ml （2） 用缓冲液1平衡2-5个床体积，流速为2ml/min （3） 取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的缓冲液1中，用0.45μm的滤膜过滤，上样，流速为 1ml/min （4） 用缓冲液1再洗2-5个床体积，流速为2ml/min （5） 最后缓冲液2进行洗脱，流速为2ml/min，收集洗脱峰，用SDS-PAGE纯化后的效果。 （6） 用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl和100mM， pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用纯水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇冲洗3个柱床体积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存。 缓冲液组成：缓冲液1：100mM pH7.4的PBS缓冲液；缓冲液2：100mM醋酸缓冲液，pH4.0。 也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋白酶类 蛋白酶。例如去除凝血酶上样缓冲液为：50mM pH7.4的PBS缓冲液含0.15M NaCl,洗脱缓冲液为： 50mM pH7.4的PBS缓冲液含1M NaCl。 S9400 Benzamidine Sepharose 4FF应用的注意事项： 1. 色谱柱装填 （1） 所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。 （2） 在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。 （3） 将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填 料先自然沉降。 （4） 柱压不超过0.3MPa，如果装柱系统中无法测柱压，则控制流速高于300cm/h，但是在使用中 一般只用最大流速的75%。 2. 蛋白的结合 平衡缓冲液可以采用如下配方：100mM pH7.4的PBS缓冲液，0.1M NaCl，pH8.0。上样完毕后， 继续用平衡缓冲液洗柱子，直到基线平稳。 3. 蛋白的洗脱 （1） 洗脱可以采取特异性或者非特异性洗脱。 （2） 特异性洗脱可以用目标分子的竞争剂，对氨基***甲脒的抑制剂。对非特异性洗脱而言， 可以选用以下几种方法： a 改变离子强度，通常加入1M的NaCl，必要的话可以采用阶段洗脱或线性梯度洗脱。 b 改变pH，可采用阶段洗脱洗脱或线性梯度洗脱来达到目的。 c 降低洗脱缓冲液的极性。如可以在洗脱缓冲液中加入10%的二氧六环等。 d 使用变性剂。如在洗脱缓冲液中加入尿素、盐酸胍等。 再生、清洗: 1．再生 用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl和100mM,pH4.0 的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇流洗3个柱床体 积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中。 如果在色谱操作过程中用到了变性剂或者去污剂，也可以用上述方法洗柱子。 2. 清洗 在应用中，柱子上结合的一些物质如变性蛋白和脂质等不能通过再生过程去除，这种情况下， 可以用去污剂如0.1%Triton X-100在37℃洗柱子1min。之后立即用5个床体积的平衡液洗柱子。 S9400 Benzamidine Sepharose 4FF注意事项： 上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
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