每次实验起始样品量	每个试剂盒每次制备的最大量 （离心柱操作）*
总RNA	Mini	Midi	Maxi
< 0.25 mg	12 (13)†	12 (28)†	6 (17)†
0.25-0.50 mg	6	12 (14)†	6 (14)†
0.50-0.75 mg	4	12 (14)†	6 (14)†
0.75-1.00 mg	3	12	6 (12)†
1.0-1.5 mg	-	-	6 (8)†
1.5-2.0 mg	-	-	6
2.0-2.5 mg	-	-	5
2.5-3.0 mg	-	-	4

* 也提供批量操作流程。
† 每个试剂盒每次制备的最大量与购买额外的离心柱，另外可提供1.5 ml 微型离心管。

Oligotex mRNA Kits 包含离心柱和所有必需的试剂，以及从总RNA中分离纯poly A+ mRNA或体外转录回收的缓冲夜。Poly A+ mRNA 纯化可在30分钟内完成，回收率>90%。Poly A+ mRNA 可直接用于所有标准应用以及诸如表达芯片、差异显示、cDNA文库构建、显微注射和SAGE技术等高灵敏应用。也单独提供Oligotex Suspension。

原理

Oligotex 树脂由大小均一（直径1.1 µm ）的聚***乙烯-橡胶颗粒组成，为完美的球状（见图)，含有 与表面共价结合的dC10T30 寡核苷酸。 Oligotex颗粒的大小、成分和表面结构经优化，均匀分散并需要最少的离心时间。颗粒形成稳定的悬浮液，为快速和高效结合多聚腺氨酸提供较大的表面积。高效率、高精确度的杂交确保通过快速、高效的杂交获得高纯度的poly A+ mRNA。mRNA回收率通常都高于90%。Oligotex 纯化过程将 poly A+ RNA流失降至最低，避免RNase降解风险，手动操作时间最少化。这些都使得该产品是同步处理多个样品的理想选择。

操作流程

经优化的Oligotex纯化流程方便简单（见流程图），通过快速离心步骤 将总RNA与Oligotex树脂和Oligotex:mRNA混合物共同孵育。试剂盒中提供的离心柱提供最方便的操作，同时为某些应用提供可选的批量操作流程。洗涤之后，用小体积量的Tris缓冲夜或水洗托mRNA，无需乙醇沉淀。

应用

应用Oligotex树脂纯化的Poly A+ mRNA 可直接用于下列下游应用：

• RT-PCR（见图"RT-PCR of Beta-Actin mRNA"）
• cDNA合成
• cDNA文库构建
• 扣除杂交
• 体外翻译
• 差异显示
• SAGE技术
• 表达微阵和表达芯片分析
•  RNase和 S1 核酸酶保护
• 引物延伸
• Northern、dot 或slot blotting（见图"Isolation of mRNA from Total RNA"）
• 显微注射

Oligotex在cDNA合成过程中可替代可溶oligo-dT引物 以制备固定化在Oligotex 颗粒上的cDNA。Oligotex:cDNA 混合物是一种可重复使用的cDNA，可直接用于扣除杂交中富集差异表达基因（1、2、3）的低丰度cDNA。之后，扣除的cDNA可用于文库筛查或构建。

Oligotex 也已经成功用于回收含poly-A 尾巴的寡核苷酸（4）。

引用

1. Hara, E., Kato, T., Nakada, S., Sekiya, S, and Oda, K. (1991) Subtractive cDNA cloning using oligo(dT)30-latex and PCR: isolation of cDNA clones specific to undifferentiated human embryonal carcinoma cells. Nucleic Acids Res. 19, 7097.

2. Hara, E. et al. (1993) DNA-DNA subtractive cDNA cloning using oligo(dT)30-latex and PCR: identification of cellular genes which are overexpressed in senescent human diploid fibroblasts. Anal. Biochem. 214, 58.

3. Kuribayashi-Ohta, K., Tamatsukuri, S., Hikata, M., Miyamoto, C., and Furuichi, Y. (1993) Application of oligo(dT)30-latex for rapid purification of poly(A)+ mRNA and for hybrid subtraction with the in situ reverse transcribed cDNA. Biochim. Biophys. Acta 1156, 204.

4. Adam, G.I.R., Cui, H., Miller, S.J., Flam, F., and Ohlsson, R. (1996) Allele-specific in situ hybridization (ASISH) analysis: a novel technique which resolves differential allelic usage of H19 within the same cell lineage during human placental development. Development 122, 839.