一步变性蛋白及基因组DNA，离心后的质粒上清中DNA在特定条件下选择性吸附于纳米磁珠上，再通过快速的漂洗，将

盐，细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后用洗脱缓冲液将质粒DNA洗脱下来。质粒DNA样品可用于克隆,PCR,芯片,测序等

下游应用。 温馨提示：DNA的得率与质粒的类型、拷贝数、大小等有关。

以下试剂、器皿需操作者提前准备：

 无水乙醇，分析纯异丙醇，25ml/ml RNaseA

 1-1000ul 移液枪及枪头, 1.5 ml 离心管,磁力分离器，旋涡混合器，高速离心机

如发现 PB20 试剂变混浊，在 30-70

o C 水浴中加热 5-10 分钟即可。

第一次使用需准备的溶液（50T)：

 PB40: 加 10.5 毫升无水乙醇到 PB40 试剂瓶里，混均，并在瓶上打勾

 PWB20: 加 42 毫升无水乙醇到 PWB20 试剂瓶里，混均，并在瓶上打勾

 25mg/ml RNaseA:加 25mg RNase 到 1ml 10mM Tris.HCl pH7-8，每管 100ul，-20

o C 保存。留 1 管 4 o C 备用

下面是以 2-3ml 2 个 OD600 菌体为例，可根据菌体量按比例调整试剂量

I. Lysis cell and remove genomic DNA

取 1.5ml（约2 OD)对数期菌体到 1.5ml 离心管, 7k rpm,1min,弃上清液。

如菌少，可重复收集一次，再取 1.5ml 菌体到上面离心管,7k rpm,1min,弃上清液

加 200 ul PB10 到上面含菌泥的离心管里，用枪头, 充分混匀, 加 3 ul 25mg/ml RNaseA，混匀，室温放置 5 min

加 200 ul PB20， 轻轻颠倒 5-6次（ 溶液应变清亮）

加 250 ul PB30， 轻轻颠倒 5-6次，

加 100 ul PB40， 轻轻颠倒 5-6次，

离心 13k rpm, 3 min

II. Capture plasmid DNA to Nano Beads

小心地取出约 650 ul 上清，放到新的 1.5ml离心管

加 650ul 异丙醇, 40 ul 刚混匀的s Nano Beads 到上步的离心管, 颠倒混匀

室温放置 5 min

把上步的离心管放到磁力分离器上 1-3 min

取出并弃上清液，注意不要取到磁珠

III. Purify DNA

加 500 ul PWB20 到上步的离心管，颠倒混匀，放置 30 sec

放到磁力分离器上 1-3min

取出并弃上清液，注意不要取到磁珠

重复PWB20 洗涤一次， 风干2-3 min

IV. Release DNA

加 100 ul EB(Elution buffer) 到上步的离心管，振荡混匀，放置 5min,轻轻混匀

放到磁力分离器上 1-3 min 或直到溶液变清亮

把上清液转到没有 DNase 的干净离心管里，注意不要取到磁珠

测试 DNA样品吸光度，每个胶孔加 5-20ul DNA溶液 跑胶；DNA 保存在-20

o C 或 -80 o C