HYQ 柱式法96孔血液RNA试剂盒 96 wellBloodRNA Kit(HG40602-4x96)
英文名称: 96 wellBloodRNA Kit
型号:null    产品货号: HG40602-4x96
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: 美国

 

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和下游操作,链霉亲和素单层可确保没有明显泄漏,而通过避免吸附过量的链霉亲和素,批次一致性和结果的可重复性得到了保证。PangoBeads Mag SA 以聚合物为基材的实心微球,主要用于免疫检测、免疫沉淀、细胞分选等。

 

二、产品特性

 

产品名称

PangoBeads Mag SA

基质

聚合物

粒径 

2μm

浓度

10 mg/ml

保存条件

PBST(pH.4,0.01% Tween-20),2-8℃

 

 

 

1000 pmol free biotin/mg of beads

 

 

 

 

 

 

 

结合量

20μg biotinylated antibody/ mg of beads

 

 

 

 

400 pmol biotinylated oligonucleotides/mg of beads

 

 

 

 

 

 

三、注意事项

 

 

 

 

 

 

 

1.

 

请勿离心、干燥或者冷冻磁珠,这些操作可能导致磁珠的聚集从而降低结合活性;

 

 

 

 

2.

从磁珠保存管中移取磁珠前应充分震荡重悬均匀,操作过程中应避免产生气泡;

 

 

 

 

3.

生物素标记好蛋白或核酸后,用脱盐柱去掉多余的游离生物素;

 

 

 

 

4.

尽量减少蛋白降解,包括制备细胞裂解液中包含的蛋白酶抑制剂;

 

 

 

 

 

5.

 

 

生物素化分子的大小会影响磁珠的载量,用户需要根据实验确定磁珠对特定生物素化分子的载

 

量。

 

 

 

 
        

 

 

四、手动操作步骤

 

以下操作过程需要准备的试剂:

 

 

缓冲液名称

 

成分

 

 

Buffer  I  (适用于结合生

10mM  Tris-HCl(pH7.5),1mM  EDTA,1M  NaCl,

物素化核酸)

0.01%~0.1% Tween-20;

 

 

 

 

Buffer II  (适用于结合生

PBS ,pH7.4 ,含0.05%

Tween-20 ,可根据需要添加

物素化抗体/蛋白)

0.01%~0.1% BSA;

 

 

 

 

 

注:用户可根据需要调整缓冲液的盐浓度及pH

 

1. 固定化核酸

 

1.1 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上 20s,振荡重悬磁珠,取 100μl磁珠到新的离心管中,置于磁力架上,1min后移除上清液;注意:用户可根据生物素化分子的多少,参考磁珠的载量,计算需要取用的磁珠量,

 

建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的 1~2  倍,使磁珠饱和。

 

1.2 用 1ml Buffer I洗涤磁珠二次;

 

磁珠洗涤过程:加入对应的buffer到离心管中,盖上离心管盖,涡旋震荡磁珠15s,磁性分离,移去上清液;

 

1.3 加入 500μl的用 Buffer I稀释的生物素化核酸(使磁珠浓度为 2mg/ml),充分振荡重悬磁珠,将离心管置于旋转混合仪上,室温旋转混合 30min;

 

1.4 磁性分离,将上清液转移至新的离心管,用 Buffer I洗涤磁珠三次;

 

1.5 根据后续实验的要求,加入合适的低盐缓冲液,重悬磁珠;

 

备注:用户可以通过测定反应前后核酸的浓度,计算结合到磁珠上的核酸量。

 

2.固定化抗体/蛋白

 

2.1 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上 20s,振荡重悬磁珠,取 100μl磁珠到新的离心管中,置于磁力架上,1min后移除上清液;注意:用户可根据生物素化分子的多少,参考磁珠的载量,计算需要取用的磁珠量。

 

建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的 1~2倍,使磁珠饱和。

 

2.2 用 1ml Buffer II洗涤磁珠 3次;

 

磁珠洗涤过程:加入对应的buffer到离心管中,盖上离心管盖,涡旋震荡磁珠15s,磁性分离,移去上清液;

2.3  加入1ml 用Buffer II  稀释的生物素化抗体/蛋白(使磁珠浓度为1mg/ml),充分振荡重悬, 磁珠。将离心管置于旋转混合仪上,室温旋转混合 60min;

2.4 磁性分离,将上清液转移至新的离心管中;

2.5 用 1ml Buffer II洗涤磁珠 5次;

2.6 根据客户后续试验需要的磁珠浓度,加入适量 Buffer II或其他合适的缓冲液,重悬磁珠。至此结合生物素化抗体/蛋白步骤完成。磁珠可用于后续操作。