重组大鼠表皮生长因子Recombinant Rat EGF
型号:null    产品货号： 400-25
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: peprotech

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="FONT-FAMILY: 宋体; COLOR: rgb(0,0,0); FONT-SIZE: 9pt; mso-spacerun: yes">本比色分析试剂盒是基于孔雀绿、钼酸盐和自由***酸根离子形成绿色复合物测定自由***酸根离子含量。该反应快速、灵敏、可用分光光度计(600 – 660nm)或酶标仪方便地测量。试剂适用于试管、比色皿或多孔板(96或384孔板)。

产品特点

试剂稳定性高：由于我们的创新配方，试剂没有沉淀析出，因此测试前不需预先过滤试剂。

高灵敏性：检测范围0.02 - 40 mM ***酸根。

快速和方便：均相法只需混合和测量，20分钟内量可完成检测。

兼容性高：试剂适用于试管、比色皿、96或384多孔板，分光光度仪或酶标仪上读数。

重复性高：在96/384孔板上Z’因子为0.7-0.9，易于自动化作高通量药物筛选。

产品用途

***酸酶检测：从肽、蛋白质或小分子底物中释放的***酸***酸根离子。

脂肪酶检测：从***脂中释放的***酸根离子。

核苷三***酸酶检测：从核苷三***酸(ATP, GTP, TTP, CTP等)中释放的***酸根离子。

***酸根定量测定：存在于***脂、蛋白质和DNA等物质中的***酸根。

药物开发：高通量筛选***酸酶抑制剂。

试剂盒组成：用96孔板可做2500次测试

试剂A：50 mL     试剂B：1 mL   标准液：1 mL 1 mM***酸盐

储藏条件：4°C下保存，保质期一年。

预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中严格遵循实验安全措施。

96孔板法测试步骤

制备足够量的工作试剂：将试剂放置至室温。 混合100 vol试剂A和1 vol 试剂B(如：5 mL试剂A和50 mL试剂B)。每个检测需20mL工作试剂。工作试剂可在常温下保存一天。

注意：检测前，确保所有酶和缓冲液不含***酸盐。将20mL工作试剂与80mL酶/缓冲液混合，620nm处OD值应该低于0.2；如果OD值超过0.2，则水或所用试剂中可能含过量的***酸盐。

1、***酸根标准：混合40µL 1mM的标准液和960µL蒸馏水得到40 µM的***酸盐标准液。按照下表稀释标准液，转移80mL标准液到平底透明的96孔板的不同孔中。

No

Premix + H2O

Final Vol     (mL)

Phosphate

Conc (mM)

pmoles Phosphate

in 50 mL

1

200mL +   0mL

200

40

2,000

2

160mL +  40mL

200

32

1,600

3

120mL +  80mL

200

24

1,200

4

  80mL + 120mL

200

16

  800

5

  60mL + 140mL

200

12

  600

6

  40mL + 160mL

200

  8

  400

7

  20mL + 180mL

200

  4

  200

8

    0mL+200mL

200

  0

     0

2、转移80mL样品到平, 板的不同孔中。

注意：对ATP酶/GTP酶反应，ATP和GTP的浓度应< 0.25mM。如果ATP或GTP浓度>0.25mM，用蒸馏水稀释(比如，ATP酶反应物含有1 mM ATP，检测前加入4倍的水稀释反应混合物)。

3、在每个孔中加入20µL工作试剂。轻敲平板将试剂混合均匀。注意：工作试剂会终止酶反应。

4、在室温下反应30分钟，颜色变深。

5、记录600-660nm (620nm)吸光值。

注意事项

比色皿检测：步骤和96孔板检测步骤一样。不同的是，标准液和样品的量是800µL，工作试剂200µL。

384孔板检测：标准液和样品的量是40µL，工作试剂10µL。

沉淀：***酸盐浓度很高(>100 mM) 或蛋白质和金属含量高时会发生沉淀。如果出现沉淀，用水稀释样品，直到不会出现沉淀，用稀释的样品重复测试，结果乘以稀释倍数。

酶反应：由于任何外来的***酸盐会干扰测试，确保酶准备过程中和缓冲液所用试剂不含***酸盐。

液体处理：检测混合液含有0.4M硫酸，可用等量的NaOH中和废液。

数据分析

绘制标准曲线，通过标准曲线测定样品中***酸盐的浓度。

论文发表

1. Guérette, D. et al (2007). Molecular evolution of type VI intermediate filament proteins. BMC Evolutionary Biology 2007, 7:164. 

2. Green, M.L. et al (2005). Ethylene glycol induces hyperoxaluria without metabolic acidosis in rats. Am J Physiol Renal Physiol 289: F536–F543. 

3. Saran, D. et al (2006). Multiple-turnover thio-ATP hydrolase and phospho-enzyme intermediate formation activities catalyzed by an RNA enzyme. Nucleic Acids Research, 34(11): 3201–3208.

4. Adkins, M.W. et al (2007). Chromatin disassembly from the PHO5 promoter Is essential for the recruitment of the general transcription machinery and coactivators. Mol. Cell. Biol. 27: 6372–6382.