DNA病毒基因组提取试剂盒

产品简介: 

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取 DNA病毒基因组，不适合于 RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组 DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤： 

     使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

1、  取病毒上清液 0.5ml，12000rpm离心 5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀。 

2、  向病毒上清中加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K，充分混匀，65℃消化 10-20min，期间可颠倒离心管混匀数次。  

3、  向管中加入 500ul 结合液，充分混匀。再向管中加入 400ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置 2min。（吸附柱的最大容积为 750ul，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。） 

4、 12000rpm离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 

5、  向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 

6、  向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 

7、 12000rpm 离心 2min，将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。 

8、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50ul-100ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min，12000rpm离心 1min。 

9、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min， 12000rpm离心 2min，即可得到高质量的病毒基因组 DNA。

注意事项: 

1、试剂盒拆封后，蛋白酶K需放置-20℃保存。 

2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。 

3、若结合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用，不影响效果。 

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率。洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH  值低于7.0会降低洗脱效率DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。 

5、DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DN**段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为 1.0 相当于大约 50 ug/ml双链DNA、40 ug/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 

6、如果病毒含量过低，最后提取的基因组DAN电泳可能无法检测到，但PCR等其他实验还会有结果。 

本实验相关试剂：

E1020	EB染色液
D1010	6×DNA LoadingBuffer
T1060	50×TAE缓冲液
T1050	5×TBE缓冲液
M1060	D2000DNALadder
M1400	1kbDNALadder
G8142	GoldViewII型核酸染色剂(5000×)

以下为索莱宝实验室自产相关试剂盒。

D1500	植物基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1600	细菌基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1700	动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1800	全血基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1850	全血基因组DNA提取试剂系统	50T/200T	360/960
D1900	酵母基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D2100	通用基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D2300	真菌基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	500/850
D2400	DNA病毒基因组提取试剂盒	50T/100T	400/700
D2600	土壤基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	680/1200
D2700	粪便基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
R2000	RNA病毒基因组提取试剂盒	50T/100T	700/1180

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