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    本试剂盒所带T4 DNA Ligase能催化dsDNA、dsRNA或DNA/RNA的5’-***酸末端和3’-羟基末端形成***酸二酯键。该酶不仅能催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口，在Solarbio公司特制的2×Quick Ligation Buffer中，室温(25℃)下反应5分钟即可完成连接反应，反应液可直接用于转化，使用方便、快捷，极大地缩短了试验时间。本试剂盒可应用于DNA片段克隆入载体、文库构建、TA克隆、Linker连接以及线性DNA的再环化等试验。

产品包装：

试剂盒组成              20T           保存

T4 DNA Ligase    20ul (200U/ul)      -20℃

2×Quick Ligation Buffer   200ul     -20℃

无菌去离子水              1ml          RT

    单位定义：在20ul连接反应体系、0.12uM(300ug/ml)的5’-末端浓度条件下，16℃反应30分钟，能使50﹪Hin d III消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。    使用方法：

（1）、按下面配制反应体系

2×Quick Ligation Buffer 10ul

载体 50ng

插入片段 50-150ng

T4 DNA Ligase 1ul

dd H2O up to 20ul

（2）、室温下反应5分钟，反应产物冰上冷却，然后直接用于转化或冻存于-20℃。注意不要热失活，热失活会急剧降低转化效率。

当插入片段超过1.5kb时，延长反应时间至15-30分钟。

注意事项：

（1）、2×Quick Ligation Buffer用前应彻底混匀，避免反复冻融，可适当分装成小份以保证质量。

（2）、为保证有效连接，总的载体DNA插入片段的浓度应在1-10ug之间。对单插入来说，插入片段: 载体比例在2：1-6：1之间最好，低于2:1会降低连接效率，高于6:1会产生多个插入。

（3）、如果是做电转化，请将连接产物纯化后再进行电转化。 

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