高通量检测miRNA表达的方法有许多,如芯片检测或微珠检测的方法,这些方法在分析时需要把miRNA反转录成cDNA。为了简化实验流程,Signosis开发出一种微孔板杂交技术用于高通量检测miRNA的表达,总RNA无需预处理,可直接进行杂交和检测,重要的是可同时分析47种miRNA的表达。
A. 产品优势
灵敏度高——较miRNA Northern Blot分析敏感100倍;
分辨力强——在分辨同源miRNA 时,较Northern Blot有更高的分辨力;
差别定量——两个或更多样本miRNA表达的差异可定量比较;
操作简便——整个实验操作步骤只是加样、孵化、洗涤,如ELISA实验一样简单。
B. 技术原理
通过捕获oligo和连接oligo将待测miRNA分子的一端与微孔板连接,另一端连接生物素标记的检测oligo,再由辣根过氧化物酶标记链霉亲和素和发光底物检测。这种杂合体结构对miRNA分子序列非常敏感,一个核苷酸的差异即会阻止杂合体的形成,因此可分辨同源miRNA。
C. 原理及操作步骤示意图

D. 结果展示

用miRNA微孔板芯片检测试剂Ⅰ分析人骨骼肌和肾脏中的47种miRNA的表达,结果显示miR-1和miR-133在骨骼肌中特异性表达。
miRNA微孔板芯片检测试剂Ⅰ(47 miRNAs) MA-1001
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | let-7b-5p | miR-17-5p | miR-29a-3p | miR-132-3p | miR-182-5p | miR-206 | let-7b-5p | miR-17-5p | miR-29a-3p | miR-132-3p | miR-182-5p | miR-206 |
B | miR-1 | miR-18a-5p | miR-34a-5p | miR-133 | miR-192-5p | miR-210-3p | miR-1 | miR-18a-5p | miR-34a-5p | miR-133 | miR-192-5p | miR-210-3p |
C | miR-7-5p | miR-19a-3p | miR-92-3p | miR-143-3p | miR-194-5p | miR-214-3p | miR-7-5p | miR-19a-3p | miR-92-3p | miR-143-3p | miR-194-5p | miR-214-3p |
D | miR-9-5p | miR-19b-3p | miR-101a | miR-145-5p | miR-196a-5p | miR-222-3p | miR-9-5p | miR-19b-3p | miR-101a | miR-145-5p | miR-196a-5p | miR-222-3p |
E | miR-10b-5p | miR-20a-5p | miR-106a-5p | miR-146a-5p | miR-199a-5p | miR-223-3p | miR-10b-5p | miR-20a-5p | miR-106a-5p | miR-146a-5p | miR-199a-5p | miR-223-3p |
F | miR-15a-5p | miR-21-5p | miR-107 | miR-148a-3p | miR-200 | miR-342-3p | miR-15a-5p | miR-21-5p | miR-107 | miR-148a-3p | miR-200 | miR-342-3p |
G | miR-15b-5p | miR-24-3p | miR-122a-5p | miR-155-5p | miR-204-5p | miR-372-3p | miR-15b-5p | miR-24-3p | miR-122a-5p | miR-155-5p | miR-204-5p | miR-372-3p |
H | miR-16-1 | miR-26a-5p | miR-125a-5p | miR-181a-5p | miR-205-5p | U6 | miR-16-1 | miR-26a-5p | miR-125a-5p | miR-181a-5p | miR-205-5p | U6 |