M13mIC7基因工程的基本操作程序：

1、目的基因的获取

（1）目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因。

（2）获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。

2、基因表达载体的构建

（1）M13mIC7目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DN**段之间连接形成的产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物、目的基因和目的基因连接物三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离、纯化(或筛选)。

(2)M13mIC7用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是载体和载体连接物；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物。

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是启动子mRNA。

(4)M13mIC7在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_EcoRⅠ和BamHⅠ。XY0201 pSURE -T Simple 载体连接试剂盒 20次/60次/20次(带T4ligase)/60次(带T4ligase)

XY0301 pGEMX -T Easy 载体连接试剂盒 20次/60次/20次(带T4ligase)/60次(带T4ligase)

XY0401 pBLUE-T 载体连接试剂盒 20次/60次/20次(带T4ligase)/60次(带T4ligase)

XY0501 通用T载体菌落PCR鉴定试剂盒 80次-100次/400次-500次

XY0601 平末端DNA加A试剂盒 25次/50次

XY0801 高效感受态细胞制备试剂盒 100×100μl/200×100μl/400×100μl

XY0101 BCA蛋白定量试剂盒 200次/500次/2500次/5000次

XY0201 Bradford法蛋白定量试剂盒 250次/1000次/2500次

XY0401 超敏可逆蛋白染色试剂盒 250ml/1L

XY0501 新型快速蛋白染色试剂盒 20次/60次

XY0601 加热型快速考马斯亮兰染色液 250ml/500ml/2000ml

XY0701 蛋白印迹膜再生液Stripping Buffer 6次/12次/40次

XY0801 超敏可逆蛋白印迹膜染色试剂盒I 100ml/250ml

XY1001 细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒 50次

XY1101 通用蛋白裂解/抽提试剂 50ml/100ml

XY1201 RIPA裂解液 50ml/100ml

XY2401 UltraECL底物化学发光检测试剂盒 50ml(A液B液各25ml)/100ml(A液B液各50ml)/500ml(A液B液各250ml)

XY2501 碱性***酸酶底物显色试剂盒(BCIP/NBT) 100ml

XY0101 GenFectinTM基因转染试剂 0.5ml(可做250次6孔板或者35mm平皿转染)/1ml(可做250次6孔板或者35mm平皿转染)

RNA纯化

XY3060 非冻型组织RNA保存液 100mL|250mL

XY111202 非冻型血液RNA保存液 10mL|100mL

XY80601 非冻型细菌RNA保存液 100mL|250mL

XY91103 非冻型拭子病毒保存液 100mL

XY110810 病毒沉淀剂 100mL