英文名称： Bacterial genome DNA rapid extraction kit
试剂级别： 试剂级
细菌基因组DNA快速提取试剂盒
货号 | 规格 | 价格 |
N1151 | 50次 | 485 |
N1152 | 100次 | 875 |
产品组分
组分 | 货号 | |
N1151 | N1152 | |
消化缓冲液DS | 15 ml | 30 ml |
裂解液MS | 20 ml | 40 ml |
蛋白酶K | 1 ml | 2 ml |
去蛋白液PS | 30 ml | 60 ml |
漂洗液PE | 15 ml | 30 ml |
纯化液TE | 5 ml | 10 ml |
DNA纯化柱 | 50个 | 100个 |
说明书 | 1份 | 1份 |
注： 裂解液MS中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。
漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
保存条件
蛋白酶K于-20℃保存，其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。
消化缓冲液如DS和MS有沉淀，在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。
产品说明
本产品用于细菌基因组DNA的小量提取。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清
洗除去蛋白质、脂质等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从0.5-2 ml对数生长期的菌液（不超过106–108 个）中提取到3-20μg 超纯基因组DNA
（OD260/280 = 1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于酶切、PCR等后续实验。
产品特点
- 高效：一次可获得3-20 μg基因组DNA。
- 快速：30min内即可获得超纯的基因组DNA。
- 安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。
- 高纯度：无须再纯化即可直接用于下游实验。
产品用途
- 常规限制性酶切
- PCR扩增
- 文库构建
- Southern 杂交
- 分子标记分析
质量控制
纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。
细菌基因组DNA提取流程图
图1 细菌基因组DNA纯化流程图
操作方法
1 取0.5-2 ml处于对数生长期菌液，置于1.5 ml离心管中。12,000 rpm离心1min，弃上清。
2 向收集到的菌体沉淀中加入200 μl 缓冲液DS，用漩涡振荡器剧烈振荡直至菌体彻底悬浮。
注：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，需加入溶菌酶消化细胞壁后，再进行基因组DNA的提取。具体方法为：向步骤1收集到的菌体中，加入180 μl 缓冲液（20 mM Tris, pH8.0，
2 mM EDTA，1.2% Triton100）和终浓度为20 mg/ml的溶菌酶（东盛货号：N9021），振荡混匀。37℃处理30min以上。
如需要去除RNA，加完消化缓冲液DS或溶菌酶后，加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液，震荡混匀，室温放置5min。
3 加入20 μl蛋白酶K溶液，混匀。
4 加入220 μl裂解液MS，漩涡振荡混匀，直至形成均一的悬浮液。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细菌细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的
DNA 不纯。
如菌体超过1.5 ml，可适当延长温浴时间。
5 加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀，将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。
如柱子堵塞表明菌体过量。若发生此情况，减少菌量，或适当延长离心时间，直至洗脱液顺利离心至离心管为止。
6 加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱，以获得高质量基因组DNA。
7 加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。
8 加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
9 12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。
注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。
10 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空加入30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。于12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。
-20保存。
注：洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。
对洗脱液TE 60℃预热，会提高基因组DNA的产量。
图2 细菌基因组DNA电泳图
注意事项
1 应尽量使用新鲜的菌体，确保提取的基因组DNA不被降解。
2 在操作步骤4中，菌体应充分悬浮，不要残留菌块，避免影响溶菌效果。
3 在操作步骤5种，加入无水乙醇后，可能会出现絮状沉淀，应将离心管内的溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中，确保基因组DNA的得率。
4 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。分装后保存于-20℃或-80℃。
5 基因组DNA 浓度及纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。
基因组DNA的浓度及纯度检测
1 基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2 DNA 应在OD260 处有显著吸收峰， OD260 值为1 相当于大约50μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。
3 OD260/280比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用纯化液TE，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。