Power Green qPCR Mix

产品组分

组分	P2101	P2102
2×Power Green qPCR Mix	1 ml	1 ml×5
超纯水	1 ml	1 ml×5
ROX Reference Dye, 100X	20μl	100μl

●  P2101可进行100次反应（20μl标准PCR反应体系每次使用10μl）；

●  P2102可进行500次反应（20μl标准PCR反应体系，每次使用10μl）。

 

质量控制

    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；功能测试：qPCR分析扩增的特异性、敏感性与可重复性。

 

保存条件

    -20℃避光保存2年。

产品说明

Power Green qPCR Mix是2×浓缩的实时定量PCR扩增的预混合溶液，含有Hotstart Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液、SYBR® Green Ⅰ等扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时定量PCR。本产品与绝大多数厂商的实时荧光定量PCR仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Corbett、Bio-Rad和Roche。

     本产品适用于快速荧光定量PCR扩增，适用范围广，具有高特异性，高效率，高重复性特征，无非特异性扩增，实验结果可信度高。

 Hotstart Taq DNA聚合酶采用了基于核酸适配子 (aptamer) 的抑制剂，不仅使用方便，而且减少了引物二聚体和其他次级产物对反应的干扰。这种基于核酸适配子的抑制剂能够与聚合酶发生可逆结合，当温度低于 45℃ 时强抑制聚合酶活性，因而能够在室温下建立反应。在72℃时TaqDNA聚合酶即能被激活，无需另外的高温温育步骤。采用这种双重热启动Taq DNA聚合酶进行PCR扩增，能够获得更高的扩增效率、特异性。

 应用举例--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

反应体系 

 样本溶液                                ＜100ng

 Primer 1（10 μM ）             0.4μl

 Primer 2（10 μM）              0.4 μl

2×Power Green qPCR Mix          10μl

 dd H₂O                                      补足至20 μl

 

如果溶解曲线出现杂峰，可以减少Mix用量

特异性反应体系

 样本溶液                                ＜100ng

 Primer 1（10 μM ）              0.4μl

 Primer 2（10 μM）              0.4 μl

2×Power Green qPCR Mix           8μl

 dd H₂O                                    补足至20 μl

 

如果对痕量模板的检出率低，可以增加Mix用量

高灵敏反应体系

样本溶液                                ＜100ng

 Primer 1（10 μM ）               0.4μl

 Primer 2（10 μM）              0.4 μl

2×Power Green qPCR Mix         12μl

 dd H₂O                                         补足至20 μl

 反应条件（三步法）

    94℃     3min

95℃    15s

T_m -5℃  15s

72℃     30s

×40Cycles（data collection）

反应条件（二步法）（Primer T_m≥60℃）

     94℃    3min

95℃    15s

60 ℃    30s

×40Cycles（data collection）

注：三步法重复性更好，且适合不同退火温度。

注意事项------------------------------------------------------------------------------

1.将Power Green qPCR Mix设定为总反应体积的1/2，其他的反应组分请参照 最优条件进行调整。 最优条件确定后，如需改变反应体系总体积，各个组分按相同比例改变。

2.引物最佳终浓度为0.2-0.6 μM。引物浓度越高，扩增效率越高，但添加量过高则可能引起非特异的扩增而导致实验失败。

3.在进行反应体系配置时，通常除待检样品之外的组份预混成n+x倍（n为样品数，x为分注损耗）的混合液，然后分注到各管，最后在每管中分别加入相应的待检样品液。

4.本产品依赖温度激活DNA聚合酶，低温时抑制酶活性，高温时激活酶活性, 均在极短时间完成。每一步PCR都会有低温抑制高温激活的效果，所以特异性更好。不需要PCR反应前95℃ 10min加热激活，使酶活下降，影响PCR扩增效率、定量精度。Aptamer是合成的化学物质，与Taq抗体hotstart法相比不会引入外源DNA污染。

5.模板的添加量通常在100ng以下，不同来源的DNA，最好进行梯度稀释，确定最佳模板量。

 

仪器选择指南

荧光定量仪器	Rox Reference Dye
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Step One™,  and Step One Plus™	High Rox (2%)
ABI 7500 Rox Low   Stratagene Mx3000P®, Mx3005P™, and Mx4000®	Low Rox (0.4%)
Rotor-Gene™; DNA Engine Opticon™, Opticon® 2, and Chromo 4™ Real-Time Detector; No Rox Mastercycler® ep realplex, Smart Cycler®, Roche LightCycler® 480, Bio-Rad CFX96	No Rox