HeLaScribe^® Nuclear Extract in vitro Transcription System

E3110的产品组分
2 × 20 reactions          HeLaScribe® Nuclear Extract Transcription Grade
1 × 400µl               HeLa Nuclear Extract 1X Transcription Buffer
1 × 15µl                rATP, 100mM
1 × 15µl                rCTP, 100mM
1 × 15µl                rGTP, 100mM
1 × 15µl                rUTP, 100mM
1 × 15ml                HeLa Extract Stop Solution
1 × 500µl               MgCl2
1 × 300ng               HeLa Nuclear Extract Positive Control DNA
1 × 1.25ml              Nuclease-Free Water
1 × 1ml                 Loading Dye

这个无细胞真核基因体外转录系统具有显著的特征，来源于HeLa细胞核（1）。HeLa细胞核提取物可以支持由RNA聚合酶II启动的精确转录，并能够表现出RNA聚合酶转录的基本模式和调控模式（2-4）。同时，核提取物也是各种转录因子、DNA-结合蛋白及RNA加工酶系的来源（5-8）。
HeLaScribe® Nuclear Extract in vitro Transcription System （HeLaScribe® 体外转录核提取物）中的HeLa Nuclear Extract（HeLa核提取物）是用Dignam等（1）的方法经改良而制备的。用这种方法制备的提取物可以利用人的转铁蛋白基因启动子及腺病毒2主要晚期启动子进行转录。该系统还包含所有体外转录所必须的成分以及阳性对照模板（CMV即刻早期启动子DNA）。

特点
• 已通过性能检测: 经过巨细胞病毒即刻早期基因(CMV)启动子检测。
• 方便: 可以作为完整的转录系统或只作为提取物使用。
• 阳性对照: 该系统包含CMV启动子阳性对照模板。

用途
• 检测基础转录或转录因子调控的转录。
• 检测启动子强度。
• 转录因子、DNA结合蛋白及RNA加工所需组分的来源。
• 定位mRNA起始位点。

操作手册         Technical Bulletin TB123                           

储存条件: 储存于–70°C。避免将核提取物反复冻融。

单位定义: 一个单位定义为在30oC，标准条件下，以CMV即刻早期启动子片段为模板，每小时将50fmol核苷酸掺入到363-核苷酸run-off转录本中所需要的HeLaScribe® 提取物的量。

参考文献
1.Dignam, J.D. et al.(1983) Nucl. Acids Res.11, 1475–89.
2.Sawadogo, M. and Roeder, R.G. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA82,4394–8.
3.Briggs, M.R. et al.(1986) Science234, 47–52.
4.Bagchi, M.K. et al.(1990) J. Biol. Chem.265, 5129–34.
5.Carthew, R.W. et al.(1985) Cell43, 439–48.
6.Kristie, T.M. et al.(1989) EMBO J.8, 4229–38.
7.Sawadogo, M. et al.(1988) J. Biol. Chem.263, 11985–93.
8.Krainer, A.R. et al.(1984) Cell36, 993–1005.

技术资料                           
Promega Notes                       PN055

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