zeocin盐酸博莱霉素 (细胞培养级) 英文名称: zeocin盐酸博莱霉素 (细胞培养级) | |||||||||||||||||||||
型号:null 产品货号: R25001 | |||||||||||||||||||||
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品牌: invitrogen | |||||||||||||||||||||
zeocin盐酸博莱霉素 (细胞培养级) Zeocin可选择Sh ble 基因表达的细胞。 与现在使用的其他动物细胞标记物无交叉抗性。因此这种抗生素可用来分离对其他筛选剂(如:庆大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin 是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素, 在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli )、真菌(如:酵母菌)、植物细胞、动物细胞。 使用: ● 液体Zeocin 可用于细胞培养。 ● 用于筛选转化株的Zeocin 浓度根据PH 值和盐浓度改变。 ● PH 越高,盐浓度越低Zeocin 活性越大。 ● 普通大肠杆菌菌株筛选可在25 µg/ml zeocin 浓度的低盐LB 琼脂培养基中进行,PH 调至7.5 。 ● 动物细胞筛选:根据不同细胞系从100 到 750 µg/ml 。 ● 植物细胞筛选:根据不同的细胞种类和培养基从50 到 250 µg/ml 。 ● 酵母筛选:取决于种属和培养基,S. cerevisiae Sh ble 转化株在50 µg/ml 浓度的YPD 培养基中筛选,PH7.0. 举例:构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pcB-Zeo-GFP。方法质粒LeCo-G/Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段,通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt,通过菌落PCR,酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒,构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组,经Zeocin药物筛选2代后,用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达。结果经菌落PCR,1号、5号和10号菌落中扩增出426bp的目的条带,与预期的大小完全一致,经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-zeo-GFP;该质粒与野生型痘苗病毒同源重组,得到了重组的痘苗病毒;Zeocin筛选2代后,病毒上清感染细胞,流式细胞分析7.18%的细胞中有GFP的表达,而阴性对照仅有1.43%;Zeocin药物筛选5代后,通过激光共聚焦可在80%以上的细胞中观察带GFP;提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带。结论含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性,非常容易进行筛选鉴定。 订购:
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