Robust Tn5转座酶是野生型Tn5转座酶的高活性突变体，可以高效的将Tn5转座子插入到目标序列。RobustTn5转座酶识别Tn5转座子酶序列的内端（inside end，IE）、外端（outside end，OE）和嵌合端（mosaic end，ME）序列，含有ME序列片段的体外转座效率最高(1)。Robust Tn5转座酶的插入位点具有很高的随机性(2)，因此被广泛的用于体外转基因（外源基因整合到宿主细胞）和二代测序建库等领域。