
lambda gt102载体构建的基本实验步骤包括(1)目的DNA片段和载体的制备;(2)目的DNA片段和载体的连接;(3)连接产物的转化;(4)克隆筛选。
技术流程如下:
1、miRNAs序列分析;
2、PCR引物设计及合成;
3、PCR扩增pri-miRNA序列或者单链互补引物退火形成pre-miRNA序列;
4、将片段克隆至含有CMV强启动子的载体上;
5、lambda gt102测序以确保插入序列正确性;
6、向客户提交测序结果与实验方法报告单。
基因过表达载体构建
基因过表达指细胞利用自身元件把储存在表达质粒DNA中的遗传信息转录、翻译成具有生物活性的蛋白质分子的过程,基因过表达是目前研究基因功能最常用的手段。
lambda gt102可以提供以PCR为基础的各类载体构建,如细菌表达载体、酵母表达载体、动物表达载体,报告基因载体等。
●多顺反子表达(multi-cistron expression): 通过2A、IRES、多启动子、融合表达等手段,在一个质粒里实现同时表达两个或者两个以上基因。
●上百种工具载体可选,满足不同研究需要:包括各种原核、真核表达载体、以及各种病毒载体。
●多种报告基因示踪: 绿色荧光蛋白:GFP、eGFP、emGFP、ZsGreen1、hrGFP,红色荧光蛋白:mcherry、DsRed-Express2、tdTomato,此外还有YFP等。
●可选择各种启动子: CMV、mCMV、EF1a、PGK、SV40、UBC,CAG以及各种组织特异性启动子。
●lambda gt102多种亲和标签融合:His、flag、GST、c-myc、HA、MBP等等。XY60904一站式RNA电泳套装10次XY90317一站式DNA尿素-PAGE电泳套装30次XY70606一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装30次XY100205一站式DNA非变性PAGE电泳套装30次XY51210超快核酸电泳液干粉20L|50LXY100211TAE电泳液,50×250mL|2500mLXY90313TBE电泳液,10×250mL|2500mLXY100816碱性胶电泳液,10×250mLXY3150RNA电泳液,10×100mL|250mLXY3690DNA上样液,6×10mL(A)|10mL(B)XY3130三合一RNA上样液1.5mL(A)|1.5mL(B)XY101222DNA碱性胶上样液1.5mL|10mLXY70608miRNA尿素-PAGE上样液1.5mL|10mLXY100874DNA尿素-PAGE上样液1.5mL|10mLXY100875DNA 非变性PAGE上样液1.5mL|10mLXY3280SYBR GreenⅠ,电泳级50μLXY61201耐热型SYBR染料,电泳级50μLXY70303绿如蓝核酸染料(UV型)0.5mL|1.5mLXY121002绿如蓝核酸染料(可见光型)10mLXY81104超快核酸银染试剂盒1000mLXY100808溴化乙锭干粉1gXY3180溴化乙锭溶液1.5mLXY3092溴化乙锭清除剂100次XY70503DNA电泳分子量标准50次XY111107DNA电泳分子量标准(2)50次XY90602DNA电泳分子量标准(3)50次XY120654Southern专用DNA Marker20次(A)|20次(B)XY90101大片段DNA分子量标准50μgXY130960超螺旋DNA分子量标准100uLXY70605miRNA电泳分子量标准30次XY3120微量RNA助沉剂0.1mLXY131187Acryl DNA助沉剂1mLXY131188彩色Acryl DNA助沉剂1gXY131189分子生物学级糖原干粉1gXY131190分子生物学级糖原溶液1mLXY50903微量核酸沉淀剂10mLXY60402超快非醇核酸沉淀剂30次|100次XY110801核酸浓缩剂30mLXY80204柱式RNA纯化试剂盒50次XY90211低载量PCR片段纯化试剂盒50次|100次XY90212高载量PCR片段纯化试剂盒50次|100次XY100201海量PCR片段纯化试剂盒5次XY8091996孔板PCR片段纯化回收试剂盒(离心法)1次|5次XY60202柱式DNA胶回收试剂盒50次|100次XY90506胶回收及PCR片段纯化两用试剂盒50次|100次XY60706一管式DNA胶回收试剂30次|100次XY60601DNA UV防护剂3gXY70908DNA PAGE胶回收试剂盒30次|100次XY80202柱式DNA PAGE胶回收试盒50次XY80401柱式OLIGO回收试剂盒50次XY70604miRNA PAGE胶回收试剂盒40次XY80203柱式miRNA PAGE胶回收试剂盒50次XY81105琼脂糖100gXY130835低熔点琼脂糖2.5g|5gXY100864丙烯酰胺溶液(干粉型)200mLXY100877甲叉双丙烯酰胺25gXY100880四甲基***1.5mLXY100879过硫酸铵0.1g×10XY100873尿素100gXY100933MOPS(电泳级)100gXY80935剥离硅烷50mLXY90308亲和硅烷25mLXY90503电泳级甘油100mLXY100934电泳级二甲***蓝FF溶液10mLXY100882电泳级溴酚蓝溶液10mLXY100948电泳级橙黄G溶液10mLXY130965PAGE胶长加样枪头1盒XY130966水饱和正丁醇10mLXY130967预混型丙烯酰胺-甲叉双丙烯干粉(19:1)100gXY130968预混型丙烯酰胺-甲叉双丙烯干粉(29:1)100g
核酸扩增(PCR)