TaqMan 探针一步法荧光定量PCR试剂盒

(目录号HS0616)

产品包装

保存条件

-20℃避光保存。

产品简介

　　本产品是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon 等)进行一步法Real-Time qRT-PCR 的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time qRT-PCR 反应时，逆转录和定量PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA 病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA 聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率；所含的ROX 染料可校正定量PCR 仪孔与孔之间产生的荧光信号误差, 适用于以ROX 作为校正染料的所有定量PCR 仪。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

产品特点

1. 可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA进行分析。

2.  在一管内连续完成反转录和定量PCR扩增，最大限度避免污染。

3.  高效的反转录酶和热启动聚合酶保证扩增的高效率和高特异性。

4. 实验结果稳定、重复性好。

 产品应用

基因表达分析；拷贝数分析。

使用方法

以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。（反应液的配置请在冰上进行）

1. 将RNA 模板、引物、2×OneStepRT-qPCRBuffer、EnzymeMix 和RNase-FreeWater 溶解并置于冰上备用。

2. PCR 反应体系

注意

1）通常引物浓度以0.2 uM可以得到较好结果，可以在0.1 ~ 1.0 μM作为设定范围的参考。

2）使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。

3）通常RNA模板的量以10pg~100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

3. 混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。

4. 将PCR管置于荧光定量PCR仪中，按以下反应条件进行反应，

RT-PCR反应条件：

注意

1）本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5 ~ 10min条件下实现酶的活化。

2）建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃ ~ 64℃的范围作为设定参考。

 

 

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