
一个合格pXP414质粒的组成要素 复制起始位点Ori,即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因:可以便于加以检测,如Amp+ ,Kan+ 多l 克隆位点:MCS 克隆携带外源基因片段 P/E:启动子/增强子 Terms:终止信号 加poly(A)信号:可以起到稳定mRNA 作用。
pXP414质粒选择主要考虑下述3点:
1、构建DNA 重组体的目的,克隆扩增/表达表达,选择合适的克隆载体/表达载体。
2、载体的类型: (1)克隆载体的克隆能力-据克隆片段大小(大选大,小选小)。如小于10kb 选质粒。 (2)表达载体据受体细胞类型-原核/真核/穿梭,E.coli/哺乳类细胞表达载体。 (3)对原核表达载体应该注意3点。
3、pXP414质粒 MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异,适应目的基因与载体易于链接,不产生阅读框架错位。选用质粒(最常用)做载体的4点要求: ①选分子量小的质粒,即小载体(1-1.5kb)→不易损坏,在细菌里面拷贝数也多(也有大载体); ②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束,一般10个以上的拷贝,而严谨型质粒小于10个。 ③必需具备一个以上的酶切位点,有选择的余地; ④必需有易检测的标记,多是抗生素的抗性基因,不特指多位Ampr(试一试)。 无论选用哪种载体,首先都要获得载体分子,pXP414质粒然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切 割,获得分子,以便于与目的基因片段进行连接。XY60904一站式RNA电泳套装10次XY90317一站式DNA尿素-PAGE电泳套装30次XY70606一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装30次XY100205一站式DNA非变性PAGE电泳套装30次XY51210超快核酸电泳液干粉20L|50LXY100211TAE电泳液,50×250mL|2500mLXY90313TBE电泳液,10×250mL|2500mLXY100816碱性胶电泳液,10×250mLXY3150RNA电泳液,10×100mL|250mLXY3690DNA上样液,6×10mL(A)|10mL(B)XY3130三合一RNA上样液1.5mL(A)|1.5mL(B)XY101222DNA碱性胶上样液1.5mL|10mLXY70608miRNA尿素-PAGE上样液1.5mL|10mLXY100874DNA尿素-PAGE上样液1.5mL|10mLXY100875DNA 非变性PAGE上样液1.5mL|10mLXY3280SYBR GreenⅠ,电泳级50μLXY61201耐热型SYBR染料,电泳级50μLXY70303绿如蓝核酸染料(UV型)0.5mL|1.5mLXY121002绿如蓝核酸染料(可见光型)10mLXY81104超快核酸银染试剂盒1000mLXY100808溴化乙锭干粉1gXY3180溴化乙锭溶液1.5mLXY3092溴化乙锭清除剂100次XY70503DNA电泳分子量标准50次XY111107DNA电泳分子量标准(2)50次XY90602DNA电泳分子量标准(3)50次XY120654Southern专用DNA Marker20次(A)|20次(B)XY90101大片段DNA分子量标准50μgXY130960超螺旋DNA分子量标准100uLXY70605miRNA电泳分子量标准30次XY3120微量RNA助沉剂0.1mLXY131187Acryl DNA助沉剂1mLXY131188彩色Acryl DNA助沉剂1gXY131189分子生物学级糖原干粉1gXY131190分子生物学级糖原溶液1mLXY50903微量核酸沉淀剂10mLXY60402超快非醇核酸沉淀剂30次|100次XY110801核酸浓缩剂30mLXY80204柱式RNA纯化试剂盒50次XY90211低载量PCR片段纯化试剂盒50次|100次XY90212高载量PCR片段纯化试剂盒50次|100次XY100201海量PCR片段纯化试剂盒5次XY8091996孔板PCR片段纯化回收试剂盒(离心法)1次|5次XY60202柱式DNA胶回收试剂盒50次|100次XY90506胶回收及PCR片段纯化两用试剂盒50次|100次XY60706一管式DNA胶回收试剂30次|100次XY60601DNA UV防护剂3gXY70908DNA PAGE胶回收试剂盒30次|100次XY80202柱式DNA PAGE胶回收试盒50次XY80401柱式OLIGO回收试剂盒50次XY70604miRNA PAGE胶回收试剂盒40次XY80203柱式miRNA PAGE胶回收试剂盒50次XY81105琼脂糖100gXY130835低熔点琼脂糖2.5g|5gXY100864丙烯酰胺溶液(干粉型)200mLXY100877甲叉双丙烯酰胺25gXY100880四甲基***1.5mLXY100879过硫酸铵0.1g×10XY100873尿素100gXY100933MOPS(电泳级)100gXY80935剥离硅烷50mLXY90308亲和硅烷25mLXY90503电泳级甘油100mLXY100934电泳级二甲***蓝FF溶液10mLXY100882电泳级溴酚蓝溶液10mLXY100948电泳级橙黄G溶液10mLXY130965PAGE胶长加样枪头1盒XY130966水饱和正丁醇10mLXY130967预混型丙烯酰胺-甲叉双丙烯干粉(19:1)100gXY130968预混型丙烯酰胺-甲叉双丙烯干粉(29:1)100g
核酸扩增(PCR)