一个合格pVL-FH质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多l 克隆位点：MCS 克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA 作用。

pVL-FH质粒选择主要考虑下述3点：

1、构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。

2、载体的类型： （1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如小于10kb 选质粒。 （2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。 （3）对原核表达载体应该注意3点。

3、pVL-FH质粒 MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。选用质粒（最常用）做载体的4点要求： ①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）； ②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒小于10个。 ③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； ④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，pVL-FH质粒然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切 割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。XY0601 EASYspin 全血RNA快速提取试剂盒 20次/50次

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