同型半胱氨酸检测试剂盒(酶法)说明书

Homocysteine (HCY)

 

产品名称：同型半胱氨酸检测试剂盒(酶法)

英文名称：Homocysteine (HCY)

包装规格：R1:43ml R2:10ml

预期用途

用于检测人血液中的同型半胱氨酸。

同型半胱氨酸（Hcy）为含巯基氨基酸，是体内甲硫氨酸循环过程中的一个代谢中间产物。血液中总Hcy浓度的病理性升高会导致高同型半胱氨酸血症。近年来的研究已确认，高同型半胱氨酸血症与作为人类第一杀手的动脉粥样硬化、高血压、心肌梗死等多种心血管疾病的发生有密切关系，是心血管疾病的一个新的独立和重要的危险因素。目前国内外已经把Hcy作为心血管疾病的一个检测指标。

 

检测原理 

循环酶反应使信号放大。

Hcy被转化为游离型后，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷。腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD , 样本中的Hcy浓度与NADH转化速率成正比。

HCY + SAM  SAH + Met

 

 

SAH   HCY + Ado Inosine + NH3

NH3 +NADH +2-Oxoglutarate Glutamate + NAD+ +H2O

 

储存条件及有效期 

1. 试剂在2 - 8℃密封避光保存，可稳定一年。

2. 已经开启的试剂注意避免污染。

样品要求 

1. 新鲜血清或肝素抗凝血浆，请采血后立即离心分离血浆。

2. 血清、血浆可在室温稳定4天，2-8ºC稳定几周，-20ºC稳定数月或几年。

3. 注意：不可使用含有氟化钠的血清或血浆。

4. 溶血，混浊，严重血脂样本不适宜做Hcy检测。

5. 采血前，请尽量避免高蛋白饮食，高蛋白饮食可能导致Hcy升高。

6. 血清样本检测结果常比抗凝血浆检测结果高5-10％。

检验方法 （速率法）

1.  试剂配制：液体试剂开启即可使用。

2.  试验条件：

主波长 340 nm   副波长 700 nm

标本量 13 μl     

R1  240 μl    R2  65μl  

 

                            测定

  

   37℃

0           5      7.5    10（分）

3.  定标曲线

    试剂盒中提供的两个校准品两点定标。如果需要多点定标，请用生化仪

上的Spline函数曲线拟合而不是直线拟合。

4.  校准程序

试剂盒内配有专用标准，校准品溯源至HPLC。

5. 质控控制程序

选用与校准品对应的质控品，质控测定值应在规定的范围内。如果结果偏离范围，请按以下步骤查找原因：

4.1． 检查参数设置和光源是否正确。 

4.2． 检查比色杯和吸样针是否洁净。

4.3． 检查水是否被污染，细菌增长会导致不正确的结果。

4.4． 检查反应温度。

4.5． 检查试剂盒的效期。

6.结果计算 

            　样本吸光度

样本浓度 =                   　´ 标准浓度

标准吸光度

 

参考范围

根据文献资料，Hcy正常参考范围与年龄相关(血浆)：

年 龄	HCY浓度
***	≤15 µmol/l
老年人（≥60岁）	15-20 µmol/l
百岁以上	25-27 µmol/l

 

建议各实验室根据年龄、性别、饮食、地域的不同建立自己的正常参考范围。

检验方法的局限性和抗干扰性

以12.9umol/L的Hcy为基础的血清，加入不同浓度干扰物，偏差<10％的：

血氨 50umol/L

NaPi 1mmol/L

NaF 1mmol/L

甘油三酯 2500mg/dL

抗坏血酸 10mmol/L

胆红素 20mg/dL

血红蛋白 1200mg/dL

谷胱甘肽 0.5mmol/L

L－半胱氨酸 1 mmol/L

S-腺苷甲硫氨酸SAM 20umol/L

腺苷 100 umol/L

胱硫*** 20 umol/L

产品性能指标

1. 准确性

准确性偏差应不超过±10%。

2.重复性

测定值的变异系数 CV％≤10%。

根据NCCLS EP-5文件进行Hcy精密度检测：

批内	水平1（7µmol/l）	水平2（12µmol/l）	水平3（29.5µmol/l）
次数	20	20	20
CV	4.5％	1.87％	2.4%

 

批间	水平1（7µmol/l）	水平2（12µmol/l）	水平3（29.5µmol/l）
次数	20	20	20
CV	5.87％	4.88％	2.57%

3.线性范围

本法线性范围达50 umol/l，如果超出线性范围，请以0.9%的生理盐水稀释再做，结果乘以稀释倍数。

4.灵敏度

本试剂盒的检测灵敏度为1.5umol/L。

注意事项

1. 红细胞中的Hcy 释放到血浆会使Hcy结果升高， 因此要注意及时分离血浆。

2. 虽然S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)会引起严重的正干扰。 但正常人体血浆中含SAH量极低，不会造成干扰。

3. 使用下列药物治疗的病人，会引起HCY检测水平偏高：氨甲蝶呤，卡马西平，***妥英钠，一氧化二氮，6-氮尿嘧***苷。

4. 红细胞中的3-偶氮腺苷抑制反应体系中的酶，从而抑制Hcy的生成。本产品不能使用含有3-偶氮腺苷的样本。

5. 避免混用不同批号的试剂。

6. 本试剂上机参数见附页。

 

生产企业

企业名称：北京爱必信生物技术有限公司

生产地址：北京亦庄经济开发区科创6街88号3号楼

邮    编：101111

电    话：010-56315110

传    真：010-56315107

网    址：www.abxbio.com.