TNT® T7/T3 Coupled Wheat Germ Extract System

TNT® Coupled Wheat Germ Extract System(a-d)(TNT®麦胚提取物转录/翻译偶联系统)为研究者提供了一个可应用于真核生物无细胞蛋白表达的方法，它是一个转录/翻译偶联的、在一个试管中即可完成实验的系统。TNT® 裂解物系统大大地简化了处理过程，缩短了获得体外翻译结果所需的时间。标准的使用小麦胚芽提取物进行体外表达(1)的方法比较繁琐：一般是经SP6、T3或T7 RNA聚合酶启动子在体外合成RNA(2)作为模板，需要三个独立的反应，且每个反应之间有好几个步骤。TNT®系统将转录反应的组分直接整合到翻译反应中，形成混合物，避开了常规方法的繁琐步骤。此外，比起使用RNA为模板的常规的体外麦胚芽提取物反应，TNT®提取物可在1.5小时内生产出更多的蛋白质(2-6倍)。在TNT® T7 Quick Coupled Transcription/Translation System、Flexi® Rabbit Reticulocyte Lysate System 和TNT® Coupled WheatGerm Extract System中，使用25mM醋酸镁和2.5M氯化钾对体外翻译反应进行优化。

特点
  • 可靠：TNT®系统经过严格的质量控制，无论您的模板是线性DNA(仅限T3或T7)，还是环状质粒，都能确保得到高水平的转录/翻译性能。
  • 方便：单管操作避免了常规小麦胚芽翻译所需要制备RNA的时间和精力，可在6-8小时内看到由***自显影得到的翻译结果。
  • 通用性：T7和T3系统既可从线性DNA也可以从环状DNA生产蛋白质(环状DNA仅用于SP6系统，如果模板是PCR产物，则使用 Cat.# L5540，TNT® T7Quick for PCR DNA)。
  • 包含对照：系统中包括了萤光素酶对照DNA和萤光素酶检测试剂，可做功能对照用。只有全长的萤光素酶基因才有活性。

用途
  • 研究蛋白:蛋白相互作用。
  • 蛋白活性研究。
  • 小麦胚芽提取物系统特别用于研究哺乳动物转录因子的翻译，因 
    为它本身不含哺乳动物转录因子。
  • 研究蛋白-核酸相互作用。
  • 在不同的噬菌体聚合酶启动子控制下同时翻译多个基因。
  • 快速筛选和分析突变子。
  • 蛋白质截短试验(PTT)。

操作手册    Technical Bulletin TB165

储存条件：将聚合酶储存于-20。将装有萤光素酶检测试剂的96孔板储存于室温。将余下的组分储存于-70℃。避免多次冻融。

参考文献
1. Anderson, C.W. et al. (1983) Meth. Enzymol. 101, 635–44.
2. Krieg, P.A. and Melton, D.A. (1984) Nucl. Acids Res. 12, 7057–70.

技术资料

Neural Notes NN011
Promega Notes PN067, PN070, PN080, PN093

相关产品

Protein Labeling
TNT® SP6 High-Yield Protein Expression System

产品订购：