| CCK试剂盒 英文名称： Cell Counting Kit | ||||||||||||||||||||
| 型号:null 产品货号： 025 | ||||||||||||||||||||
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 | ||||||||||||||||||||
| 品牌: 北京泛博生化 | ||||||||||||||||||||
Cell Counting Kit（CCK试剂盒）
产品简介： Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 CCK法与普通的MTT法相比，具有显著特点： ★灵敏度高，数据可靠，重现性好 ★操作简便，省时省力 ★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞 ★无需***性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低 ★为1瓶溶液，不需要预制，即开即用 ★适合于高通量药物筛选 CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验 操作说明： 一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时） 1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。 3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。） 二、细胞活性检测 1、在96孔板中接种细胞悬液（100ul/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。 2、向每孔加入10 ul的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 三、细胞增值-毒性检测 1、在96孔板中配置100ul的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃,5% CO2的条件下）。 2、向培养板加入10ul不同浓度的待测物质。 3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。 4、想每孔加入10ul CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 7、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 活力计算： 细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100 保存条件：
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