FITC

CAS#：3326-32-7

中文名：异硫*酸荧光素

英文名：Flourescein iso-thiocyanate

结构式：

分子式：C₂₁H₁₁NO₅S

分子量：389.38

性质：

1. 外观：黄色粉末

2. 纯度：≥95% (HPLC)

3. 产品描述：

FITC能和各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。用于医学，农学和畜牧等方面，可对由地细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。

4. FITC标记抗体流程：

（1）  将待交联的蛋白（浓度³1mg/mL）对交联反应液透析三次4℃，至pH＝9.0。交联反应液配制方法：7.56g NaHCO₃，1.06g Na₂CO₃，7.36g NaCl，加水定容至1 L。

（2）  将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

（3）  按P:F（蛋白质:FITC）=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4℃反应8h。

（4）  加入5mol/L的NH₄Cl至终浓度50mmol/L，4℃终止反应2h。

（5）  将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。

（6）  交联物的鉴定

蛋白浓度(mg/mL) = [ A₂₈₀– 0.31×A₄₉₅ ] / 1.4

F/P比例: 3.1×A₄₉₅ / [A₂₈₀ – 0.31×A₄₉₅ ]，该值应介于2.5～6.5之间。

（7）  FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的***酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN₃、1% BSA，4℃避光保存。

储存条件：4℃避光保存