| 人抗精子抗体（AsAb）定量检测试剂盒 英文名称： Human AsAb CLIA KIT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 型号:null 产品货号： BYBY-001 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 品牌: 福建泉州 试剂级别： 试剂级 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Lonto® ELISA
仅供科研使用，不得用于临床诊断
人抗精子抗体（AsAb）定量检测试剂盒（ELISA）
货号：BYBY-001
定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液中人抗精子抗体（AsAb）的浓度。
使用试剂盒前，必须仔细阅读本说明书。
中国 | 泉州市蓝图生物科技有限公司 福建省泉州市泉港区界山镇蓝图生物科技园A栋5层 TEL: +86 (595) 27926085 FAX: +86 (595) 27973666 E-MAIL: 355902222@qq.com Phone：13559590085 WEB: http://www.lontogroup.com/ 简介 抗精子抗体（AsAb）是一个复杂的病理产物，男女均可罹患，其确切原因尚未完全明了。男性的精子、精浆，对女性来说皆属特异性抗原，接触到血液后，男女均可引起免疫反应，产生相应的抗体，阻碍精子与卵子结合，而致不孕。 上述的几种情况，即属于精子免疫性不育。女性生殖道，特别是子宫体内的巨噬细胞，在AsAb阳性时便把精子当作“异物”识别并大肆进行吞噬。正常情况下，女性的血液中是没有AsAb的，但在上述特殊情况下，女性机体对精子、精液这一抗原进行“自卫”，“一家人不认识一家人”，引起免疫系统产生抗体。而在男性，则是自身产生“自卫”，引起自己的免疫系统产生抗体，导致“自相残杀”，使精子难以生存。 抗精子抗体是一个复杂的病理产物，男女均可罹患，其确切原因尚未完全明了。男性的精子、精浆，对女性来说皆属特异性抗原，接触到血液后，男女均可引起免疫反应，产生相应的抗体，阻碍精子与卵子结合，而致不孕。抗精子阳性的女性患者，发病之前多有子宫内膜炎、阴道炎、输卵管炎等生殖系统炎症。对于这种情况可采用淋巴免疫疗法进行治疗。
实验原理 本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被人精子（As）（固相抗原）的微孔酶标板中，加入校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人抗精子抗体（AsAb）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人抗精子抗体（AsAb）的浓度。
试剂盒限制性 1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。 2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。 3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。 4、使用试剂盒配套的样品稀释液。 5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。 6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排出该因素。 7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。 技术提示 1、混合蛋白溶液时，避免起泡。 2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。 3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。 4、使用自动洗板机时，加入一个30秒浸泡的步骤，可以提高检测精度。 5、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。 6、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。 7、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 8、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
试剂盒组分与保存 未开封的试剂盒保存在2-8度，不得使用过期试剂盒。
其他用品 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择）
生物安全 1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。 2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。 3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。 4、戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。 样品的采集和储存 以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。 样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。 试剂准备 1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。 2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:30稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加29份的蒸馏水。 3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。 操作程序 所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。 1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。 2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。 3、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 4、样本孔加待测样本50μL。 5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体50μL。 6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育120min。 7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。 8、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。 9、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。 结果计算 以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。 如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。 试剂盒性能指标 1、物理性能 试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。 2、剂量反应曲线线性 校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。 3、精密度 批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。 批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。 4、灵敏度 最低检出剂量小于******。 5、回收率 三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内回收率评估，回收率在85%-115%之间。 6、样本值 1524例健康志愿者血清和血浆样品进行测定，所有的样品测量小于****。 7、特异性 本试剂盒识别天然和重组人抗精子抗体（AsAb），与结构类似物无交叉。 8、稳定性 2℃-8℃保存，有效期6个月。 |