pReg neo Vector

Regulated Mammalian Expression System(a-e)(可控哺乳动物表达系统)的特点在于本底低，可被迅速强烈地诱导，在哺乳动物细胞中进行基因表达的减量调控(downregulation)。可控哺乳动物表达系统基于新的开/关系统，开关通过嵌合反式激活蛋白***相关化合物进行迅速和灵敏的调控(1)。纳摩尔浓度的抗生素香豆霉素即可引发嵌合反式激活蛋白同型二聚体的形成，接着与位于驱动转录目标蛋白编码序列的最小启动子上游的λ操作子序列结合。蛋白表达水平可以通过调节香豆霉素的浓度来控制。更重要的是， 这一表达可以通过加入新生霉素而迅速有效的被关闭，新生霉素作为拮抗剂，可将反式激活蛋白二聚体解离。可控哺乳动物表达系统之所以适合基因表达的体内调控，在于引入哺乳动物细胞中的两种特别设计的质粒以及直接加入到培养基中的调控化合物－香豆霉素和新生霉素。目的蛋白编码区被克隆进pF12A RM Flexi®载体(a-e)或pF12K RMFlexi®载体(a-e)，这两种载体都为可控哺乳动物(RegulatedMammalian,RM)蛋白表达系统特别设计的。这些载体整合有蛋白编码区上游的调控启动子序列，并且与Flexi®载体系统兼容。以瞬时转染为例，含有目标蛋白编码区的pF12A或pF12K RM Flexi®载体与pReg neo载体(c-e)共转染进入哺乳动物细胞。在应答香豆霉素和新生霉素的调控过程中，pReg neo载体被设计为表达嵌合反式激活蛋白，
该蛋白可与pF12A或pF12K RM Flexi®载体的调控启动子区域发生作用。另外，在抗生素G-418存在的条件下，pReg neo载体编码的新霉素***酸转移酶基因可允许稳定并转染细胞筛选和增值中保持稳定。
调控化合物香豆霉素和新霉素用于瞬时或稳定转染实验，具有优良的药代动力学特性，在哺乳动物细胞中无明显毒性，且无已知的内源性结合靶标(1)。

操作手册     Technical Manual TM289

储存条件：储存于-20℃。

参考文献
1. Zhao, H-F. et al. (2003) Hum. Gene Ther. 14, 1619–29.

技术资料     Promega Notes PN095

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